1.0 物品、試劑：
10ul及200ul tip頭、0.2ml PCR薄壁管、管架、手套；
DEPC處理水、Ex-Taq試劑盒（包括PCR Buffer、MgCl2、Taq酶）、DNA marker均另購，
引物/dNTP混合物(primer/Nucleotide Mix)、陽性對照DNA (Positive Control DNA)、內標DNA (Internal Control DNA) 為普飛生物提供的VenorGem試用裝中所含。
2.0實驗方法：
2.1樣品的準備：
樣品：細胞的新鮮培養物上清，小牛血清。
分別取兩種樣品各100ul至滅菌1.5ml離心管中，將管蓋蓋緊。置95℃保溫5分鐘，短暫離心（5 sec）。
2.2 試劑的溶解配制：
將裝有以下試劑干粉的離心管離心，向管中加入DEPC處理水，充分搖勻溶解后再短暫離心。以下為各組分的加水量：
引物/dNTP混合物 (Primer/Nucleotide Mix) 55ul
陽性對照DNA (Positive Control DNA) 50ul
內對照DNA (Internal Control DNA) 50ul
2.3 PCR混合物：
向0.2ml PCR薄壁管中依次加入以下組分，

PCR組分（單位：ul）
負對照管

內對照管

陽性

對照管

牛血清

檢測管

發酵液

檢測管

水

28.8

26.8

24.8

24.8

24.8

10×PCR Buffer

5

5

5

5

5

MgCl2（25mM）

6

6

6

6

6

引物/dNTP混合物

10

10

10

10

10

內對照DNA

－

2

2

2

2

陽性對照DNA

－

－

2

－

－

處理后樣品

－

－

－

2

2

Taq酶（5U/ul）

0.2

0.2

0.2

0.2

0.2

總體積

50

50

50

50

50

蓋緊管蓋，輕彈管壁混勻，稍加離心。
2.4熱循環程序：
將準備好的PCR管放入PCR儀，運行如下程序
94℃ 2min

1個循環

94℃ 30sec

35個循環

55℃ 30sec

72℃ 30sec

降溫至4~8℃

2.5凝膠電泳：
支原體PCR檢測實驗報告1.2％瓊脂糖凝膠電泳，TBE緩沖液，PCR產物及Marker均點樣5ul，于50V下電泳1hr，EB染色15min，紫外燈下觀察。
3.0結果分析：
電泳結果見圖。

圖中泳道M為DNA Marker，1為負對照管PCR產物，2為內對照管PCR產物，3為陽性對照管PCR產物，4為牛血清檢測管PCR產物，5為發酵液檢測管PCR產物。

負對照管PCR產物無帶，內對照管在191 bp處有一條帶，陽性對照管在278 bp處有一條帶，證明本次實驗準確可靠。兩樣品檢測管均只有一條與內對照管相同位置的條帶，說明樣品檢測管PCR反應并未受到抑制，且不含支原體。