酵母單雜交體系(yeast one-hybrid system)常用于研究DNA-蛋白質間的相互作用。

酵母單雜交體系可識別穩定結合于DNA上的蛋白質，可在酵母細胞內研究真核DNA-蛋白質間的相互作用，并通過篩選DNA文庫直接獲得靶序列相互作用蛋白的編碼基因。也可用于分析鑒定細胞中轉錄調控因子與順式作用元件相互作用。

酵母單雜交原理：將已知的順式作用元件構建到zui基本啟動子(minimal promoter，Pmin)上游，把報告基因連接到Pmin下游。將待測轉錄因子的cDNA與酵母轉錄激活結構域(activation domain，AD)融合表達載體導入細胞，該基因產物如果能夠與順式作用元件結合，而激活Pmin啟動子使報告基因表達。

酵母單雜交實驗中cDNA文庫構建試劑盒的選擇及操作步驟
酵母單雜交體系主要用于分離編碼結合于特定順式調控元件或其他DNA位點的功能蛋白編碼基因，驗證反式轉錄調控因子的DNA結合結構域，準確定位參與特定蛋白質結合的核苷酸序列。

酵母單雜交用的cDNA文庫用什么試劑盒構建?

單雜交文庫可以用酵母雙雜交試劑盒中的SMART試劑盒來構建

用BD公司的酵母單雜交文庫構建和篩選試劑盒進行酵母單雜交文庫的構建。具體操作步驟為：在15 mL試管中依次加入如下成分：20 μL SMART cDNA、6 μL pGADT7-Rec2(0.5 μg/μL，SmaI-線性化)、5 μg pHIS2-PBE1釣餌載體、20 μL Herring Testes Carrier DNA(用前于100 ℃變性5 min，然后迅速置于冰上)、600 μL 酵母Y187感受態細胞，輕輕混勻，再加入2.5 mL PEG/LiAc (40% PEG 3350，1×TE Buffer，0.1 mol/L LiAc)，輕輕混勻。30℃溫育45 min，每隔15 min混合細胞1次，然后加入160 μL DMSO，混勻后置42℃熱沖擊20 min，每隔10 min混合細胞1次，反應結束后700 g 離心5 min，去掉上清，用3 mL YPD Plus Liquid Medium(BD公司)重新懸浮細胞，于30℃，265 rpm振蕩培養90 min，700 g 離心5 min，去掉上清，用6 mL NaCl (0.9%)重新懸浮細胞。為計算轉化效率，取100 μL分別稀釋10倍、100倍、1,000倍的轉化液涂布于SD/-Leu、SD/-Trp、SD/-Leu/-Trp平板上，剩余樣品涂布于SD/-His/-Leu/-Trp(含適當濃度的3-AT)平板篩選陽性克隆，30℃培養3 d-7 d。同時轉化pGADT7-Rec2-53和p53HIS2作為陽性對照以及pGADT7-Rec2-53和pHIS2作為陰性對照。