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一、體內、外細胞的差異和分化
1、差異:細胞離體后,失去了神經體液的調節和細胞間的相互影響,生活在缺乏動態平衡的相對穩定環境中,久天長,易發生如下變化:分化現象減弱;形態功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡;或發生轉化獲得不死性,變成可無限生長的連續細胞系或惡性細胞系。因此,培養中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體,它們既保持著與體內細胞相同的基本結構和功能,也有一些不同于體內細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養后,這種差異就開始發生了。
雖然體外細胞與機體細胞存有差異,但并未失去研究的意義。且不論其有許多性狀仍與體內相同(如體外培養的心肌細胞仍可博動),只從細胞遺傳學(Cyto-genetics)的角度看,離體細胞仍帶有全套的二倍體基因。細胞在培養中的表現,只不過是相應基因關閉/開啟引起的現象,這并非是缺陷。恰恰相反,在培養的細胞中某些特定功能的喪失,可為該基因的表達與調控提供線索。
2、分化;體外培養的細胞分化能力并未*喪失,只是環境的*,細胞分化的表現和在體內不同。細胞是否表現分化關鍵在于是否存在使細胞分化的條件,如Friend細胞(小鼠紅白血病細胞)在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白,血管內皮細胞在類似基膜物質底物上培養時能長成血管狀結構,雜交瘤細胞能產生特異的單克隆抗體,這些均屬于細胞分化行為。
二、體外培養細胞的分型
(一)貼附型:大多數培養細胞貼附生長,屬于貼壁依賴性細胞,判斷細胞形態時不能接體內組織學標推判定,僅大致分成以下四型:
1、成纖維細胞型:胞體呈梭型或不規則三角形,中央有卵圓形核,胞質突起,生長時呈放射狀。除真正的成纖維細胞外,凡由中胚層間充質起源的組織,如心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內皮等常呈本型狀態。另外,凡培養中細胞的形態與成纖維類似時皆可稱之為成纖維細胞。
2、上皮型細胞:細胞呈扁平不規則多角形,中央有圓形核,細胞彼此緊密相連成單層膜。生長時呈膜狀移動,處于膜邊緣的細胞總與膜相連,很少單獨行動。起源于內、外胚層的細胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態。
3、游走細胞型:呈散在生長,一般不連成片,胞質常突起,呈活躍游走或變形運動,方向不規則。此型細胞不穩定,有時難以和其他細胞相區別。
4、多型細胞型:有一些細胞,如神經細胞難以確定其規律和穩定的形態,可統歸于此類。
(二)懸浮型;見于少數特殊的細胞,如某些類型的癌細胞及白血病細胞。胞體圓形,不貼于支持物上,呈懸浮生長。這類細胞容易大量繁殖。
三、培養細胞的生長和增殖過程
體內細胞生長在動態平衡環境中,而組織培養細胞的生存環境是培養瓶、皿或其它容器,生存空間和營養是有限的。當細胞增殖達到一定密度后,則需要分離出一部分細胞和更新營養液,否則將影響細胞的繼續生存,這一過程叫傳代(Passage或Subculture)。每次傳代以后,細胞的生長和增殖過程都會受一定的影響。另外,很多細胞特別是正常細胞,在體外的生存也不是無限的,存在著一個發展過程。所有這一切,使組織細胞在培養中有著一系列與體內不同的生存特點。
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