樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC) 是一類(lèi)具有樹(shù)枝狀突起的抗原呈遞細(xì)胞，其分布廣泛，由骨髓中的髓性多能干細(xì)胞發(fā)育而成，在免疫應(yīng)答過(guò)程中至關(guān)重要。它是原發(fā)性混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中的主要刺激細(xì)胞，可激活Th 細(xì)胞發(fā)生增殖反應(yīng)，而且還能刺激產(chǎn)生TC 細(xì)胞。樹(shù)突狀細(xì)胞呈遞抗原給T 細(xì)胞提供穩(wěn)定的微環(huán)境。

基本原理
本文應(yīng)用細(xì)胞因子GM-CSF 和IL-4 使血液中單核細(xì)胞分化成樹(shù)突狀細(xì)胞，并用IFN-α促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞的成熟。
試劑和材料
● 新鮮的外周（肝素）抗凝血液
● 淋巴細(xì)胞分離液。無(wú)鈣鎂HanKs(CMF-HanKs)液
● 制劑：人重組GM-CSF(hrGM-CSF)。hrIL-4 hr IFN-α。
●培養(yǎng)液：
（1） RPMI1640 全培基：RPMI1640+10% 胎牛血清（ FCS、熱滅活）+2mmol/LL-谷氨酰胺+100IU/ml 青霉素+100μg/ml 鏈霉素+1g/L 非必需氨基酸+1 mmol/L 丙酮酸鈉+5×105 mol/L 2 巰基乙醇。
（2） RPMI1640/IL-4/GM-CSF:即RPMI 全培基+IL-4(40ng/ml)+GM-CSF(50ng/ml).
（3） RPMI1640/IFN-α:即RPMI 全培基+ IFN-α（1 ~ 10ng/ml）。

器皿及儀器
培養(yǎng)瓶（25 ml 和75 ml）CO2 孵箱、光學(xué)顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)器、垂直氣流超凈臺(tái)、離心機(jī)等。

3、培基第3 天換液，輕輕吸去原培養(yǎng)液，加入等量含有IL-4 和GM-CSF 的新鮮1640 培氧液，繼續(xù)置CO2 孵箱中培養(yǎng)。
4、促樹(shù)突狀細(xì)胞成熟：?jiǎn)魏思?xì)胞經(jīng)與IL-4 和GM-CSF 的共同孵育，7 天左右使其分化成樹(shù)突狀細(xì)胞，但并未成熟。此時(shí)輕輕吸去含有IL-4 和GM-CSF 的1640 培養(yǎng)液，更換等量的含有IFN-α的RPMI1640 培養(yǎng)液，繼續(xù)置5%CO2 孵箱中，37℃培養(yǎng)，至第9 天時(shí)可獲得成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞。

質(zhì)控與提示
1、細(xì)胞活性：用胎盼藍(lán)拒染法檢測(cè)，至少應(yīng)有90%的細(xì)胞具有活性。
2、細(xì)胞分化能力檢測(cè)：?jiǎn)魏思?xì)胞開(kāi)始培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞貼附于塑料培養(yǎng)瓶壁上，用抗CD14 熒光抗體標(biāo)記檢測(cè)，細(xì)胞純度均應(yīng)為90% ~ 100%，當(dāng)用IL-4 和GM-CSF 孵育7 天和改用IFN-α孵育至第9 天時(shí)，單核細(xì)胞分化為樹(shù)突狀細(xì)胞并不斷趨向成熟，此時(shí)細(xì)胞不再貼壁生長(zhǎng)，也不再表達(dá)CD14 抗原；但能高水平表達(dá)MHC-Ⅱ類(lèi)抗原和CD1а抗原。
3、許多種類(lèi)的誘導(dǎo)劑都可用于人脊髓細(xì)胞轉(zhuǎn)化成樹(shù)突狀細(xì)胞。
4、單核細(xì)胞，如來(lái)源于骨髓的CD34+細(xì)胞或來(lái)源于臍血的CD34+細(xì)胞等不同的始動(dòng)細(xì)胞，均可用于樹(shù)突狀細(xì)胞的分化培養(yǎng)。
5、此項(xiàng)技術(shù)基于單核細(xì)胞貼壁而設(shè)計(jì)，也可用塑料培養(yǎng)袋培養(yǎng)，防止單核細(xì)胞的貼壁，但
分離方法要改變?yōu)槌两捣ā?/p>