溶液配制

（一）lb培養基
每1000 mL加分析純NaCl 10 g，蛋白胨10 g，酵母粉5 g，用ddH2O配制，再用10 M NaOH調pH至7.4（100 mL一般加450 µL），高溫高壓蒸汽滅菌15 min冷卻后使用。
固體培養基加入瓊脂1.5%。
10 M（或N）NaOH配制方法是稱200 g NaOH加300 mL，攪拌充分溶解后定容至500 mL。
（二）溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
溶液Ⅰ：葡萄糖50 mmol/L，EDTA 10 mmol/L，Tris-HCl 25 mmol/L，pH至8.0。可一次配制100 mL，在1.05 kg/cm2高溫高壓蒸汽滅菌15 min，4℃保存。
溶液Ⅱ：NaOH 0.2 mol/L（從10 N NaOH中現用稀釋），SDS 1%，用現配現用。
溶液Ⅲ：取5 mol/L乙酸鉀 60 mL，冰乙酸11.5 mL，混合后ddH2O至100 mL。保存于4℃，用時置于冰浴中。
1 M Tris-HCl（pH 7.5）配制方法：Tris（MW 12.1）12.1 g 加濃HCl（MW 36.5）72 mL，調節pH到7.5并定容到1000 mL。1 M Tris-HCl（pH 8.0）配制方法：12.1 g Tris加800 mL ddH2O，用HCl（~42 mL）調pH到8.0。等溶液在室溫下冷卻，zui后調節pH到8.0并定容到1000 mL。高溫高壓蒸汽滅菌。
（三）酚-氯仿-異戊醇（25:24:1）
按25:24:1的比例混勻平衡酚、氯仿、異戊醇，保存于棕色玻璃瓶中，上覆一層Tris-Cl水相，4℃保存備用。酚-氯仿-異戊醇混合物在100 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0）緩沖液下在不透光的瓶中可保存一個月之久。
（四）TE（pH 8.0）
10 mM Tris-HCl（pH 8.0），1 mM EDTA（pH 8.0），加ddH2O至1000 mL。高溫高壓蒸汽滅菌。或用100×TE母液稀釋。
（五）STE
10 mM Tris-HCl（pH 8.0），0.1 M NaOH，1 mM EDTA（pH 8.0），加ddH2O至1000 mL。高溫高壓蒸汽滅菌。

小提質粒（堿裂解法）

1、從平板上挑取單菌落或搖甘油菌（5~50 µL），接種于3 mL的LB液體培養基中（加于相應的抗生素），37℃振蕩培養至OD600大于2.0，無需過夜。
通常DH菌株搖12~16 hr；JM101搖7~8 hr；ER2566搖10~12 hr。
2、取1.5 mL的菌液于1.5 mL的Eppendorf管（可取未滅菌的新管）中，12000 rpm離心30 sec，棄上清。通常取1.5 mL的菌液再離心一次，棄上清后在紙上扣干。不要忘記將用完的試管及管蓋放入處以備回收處理。
3、加入100 µL溶液Ⅰ振蕩使菌體沉淀充分懸浮，務必懸浮充分。
4、加入200 µL溶液Ⅱ，立即輕輕翻轉幾下，使菌體裂解。可觀察到原渾濁的菌懸浮液變清變粘。
5、加入150 µL溶液Ⅲ，立即上下顛倒充分混勻7-10次，不宜太劇烈。可觀察到白色片狀沉淀出現。
6、置冰浴10 min，也可置于－20℃中5 min。
7、12000 rpm離心8~10 min。
8、在離心過程中可取未滅菌的新1.5 mL的Eppendorf管，加入等體積（350~400 µL即可）酚-氯仿-異戊醇（25:24:1）備用，取滅菌的新1.5 mL的Eppendorf管，加入2倍體積（780 µL體積即可）的無水乙醇于－20℃備用。加酚-氯仿-異戊醇時要小心，應吸位于下層的酚相，而不要帶入上層的Tris-Cl保護液。
9、離心完將上清迅速倒入已加的酚-氯仿-異戊醇中，充分混勻。小心不要將白色沉淀物倒入酚-氯仿-異戊醇中。
10、12000 rpm離心4~5 min。
11、吸水相，加入已加好的無水乙醇中，顛倒混勻幾次。小心不要吸入酚相，沒把握時寧可放棄一些水相。