營(yíng)養(yǎng)缺陷型是指野生型菌株由于某些物理因素或化學(xué)因素處理，使編碼合成代謝途徑中某些酶的基因突變，喪失了合成某些代謝產(chǎn)物(如氨基酸、核酸堿基、維生素)的能力，必須在基本培養(yǎng)基中補(bǔ)充該種營(yíng)養(yǎng)成分，才能正常生長(zhǎng)的一類突變株。這類菌株可以通過降低或消除末端產(chǎn)物濃度，在代謝控制中解除反饋抑制或阻遏，而使代謝途徑中間產(chǎn)物或分支合成途徑中末端產(chǎn)物積累。在氨基酸、核苷酸生產(chǎn)中已廣泛使用營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株；也可用于遺傳學(xué)分析、微生物代謝途徑的研究及細(xì)胞和分子水平基因重組研究中作為供體和受體細(xì)胞的遺傳標(biāo)記(如鼠傷寒沙門氏菌組氨酸和生物素缺陷型的突變株TAl535：his-,bio-,ΔuvrB,rfa)。
營(yíng)養(yǎng)缺陷型篩選一般分四個(gè)環(huán)節(jié)，即誘變劑處理、營(yíng)養(yǎng)缺陷型濃縮、檢出和鑒定。誘變處理突變頻率較低，只有通過淘汰野生型，才能濃縮營(yíng)養(yǎng)缺陷型而選出少數(shù)突變抹。濃縮營(yíng)養(yǎng)缺陷型有青霉素法、菌絲過濾法、差別殺菌法和饑餓法四種。檢出營(yíng)養(yǎng)缺陷型也有逐個(gè)測(cè)定法、影印培養(yǎng)法、夾層培養(yǎng)法和*補(bǔ)給法四種。鑒定營(yíng)養(yǎng)缺陷型一般采用生長(zhǎng)譜法。
本實(shí)驗(yàn)選用亞硝基胍(NTG)為誘變劑，在堿性時(shí)NTG 能形成重氮甲烷(CH2N)、烷化DNA 而使基因突變：pH 5~ 5.5 時(shí)，NTG 形成HNO2，本身也是誘變劑；pH 6.0 時(shí)，NTG 本身不變化，可作用于核蛋白而引起誘變效應(yīng)。NTG 是—種超誘變劑，殺菌力較弱，誘變作用較強(qiáng)，其作用部位又往往在 dna的復(fù)制叉處，易造成雙突變。一般選用NTG 處理時(shí)，誘變頻率較高，可使百分之幾十的細(xì)菌發(fā)生營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變，篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型時(shí)，可省去濃縮缺陷型這一環(huán)節(jié)

三、實(shí)驗(yàn)材料
(一) 菌種
棒桿菌T6-13(谷氨酸產(chǎn)生菌)。
(二) 培養(yǎng)基 配制法見附錄。
1. 細(xì)菌*培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱CM)
固體和液體。
2. 細(xì)菌基本培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱MM)
固體和液體。
3. 無氮基本培養(yǎng)基
在基本培養(yǎng)基中不加(NH4)2SO4(液體)。
4. 2 倍氮源基本培養(yǎng)基
在基本培養(yǎng)基中加入2 倍(NH4)2SO4(液體)
5. 補(bǔ)充培養(yǎng)基(簡(jiǎn)稱SM)
為滿足某特定營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的營(yíng)養(yǎng)要求而在基本培養(yǎng)基中加入某—種或幾種營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基稱補(bǔ)充培養(yǎng)基。
注：配制基本培養(yǎng)基的藥品均用分析純，使用的器皿應(yīng)潔凈，需用蒸餾水沖洗2~3 次，必要時(shí)用重蒸水沖洗。
瓊脂是從一種海藻中提取的聚半乳糖的的硫酸酯，除含少量的鈣、鎂、鈉、鉀等礦物質(zhì)外，還含有少量蛋白質(zhì)、維生素等營(yíng)養(yǎng)成分，需用洗滌處理過的瓊脂，否則會(huì)影響營(yíng)養(yǎng)缺陷型的篩選結(jié)果。洗滌瓊脂的方法有兩種：
(1) 將500 g 瓊脂放于大玻璃缸內(nèi)，加5 L 蒸餾水和500 mL 氮苯浸泡24 h，然后濾去氮苯液和水，再用蒸餾水洗滌瓊脂三次，用95%的酒精洗滌瓊脂一次，用95%酒精浸泡瓊脂過夜，濾去酒精，再用水洗，zui后把洗過的瓊脂在紗布上展成薄層晾干。處理過程約需10 d。
(2) 把瓊脂放在玻璃缸內(nèi)，用流水洗滌、并浸泡6~7d，用奈氏試劑檢查無銨離子存在時(shí)，再用紗布包起來，將水濾干，zui后展成薄層晾干備用。