【實驗目的】 
了解核酸、蛋白質、糖及酶的細胞化學反應原理，掌握Brachet反應及堿性蛋白、酸性蛋白、糖原和過氧化物酶的細胞化學染色方法。 
【實驗用品】 
一、材料和標本 蟾蜍、小白鼠各一只、肝臟石臘切片、培養的Hela細胞。 
二、器材和儀器 光學顯微鏡、解剖器材、蠟盤、載玻片、吸水紙、染色缸、蓋玻片、水浴箱。 
三、試劑pbs緩沖液(pH7.2)、甲基綠一呱咯寧醋酸緩沖液、純丙酮、l/2丙酮+1/2二甲苯、純二甲苯、70％乙醇、5％三氯醋酸、0.1％堿性固綠、0.1％酸性固綠、0.5％硫酸銅、聯苯胺混合液、1％番紅、無水乙醇、過碘酸酒精液、Schiff氏酒精液、亞硫酸水、Ehrlieh蘇木精、95％乙醇、Carnoy固定液(甲醇：冰醋酸=3:1，體積比) 
【實驗內容】 
細胞的組織化學方法，是研究細胞成分常用的方法之一。它是利用化學試劑與細胞內的某些物質進行化學反應，從而在細胞局部形成有色沉淀物，再通過顯微鏡對組織內的生物化學成分進行定性、定位、定量研究。 
一、Brachet反應一顯示細胞內的DNA和RNA 
(一)原理 
細胞經甲基綠一呱咯寧混合液處理后，其中的DNA和RNA出現不同的呈色反應，一般認為這是由于帶有負電荷的核酸對堿性染料呱咯寧和甲基綠具有親和力，且這兩種染料的作用有選擇性，甲基綠染高聚分子的DNA呈藍綠色，呱咯寧染低聚分子的RNA呈紅色。由此對細胞中的DNA和RNA進行定位、定性、和定量分析。 
(二)方法 
l．接種Hela細胞于蓋片上并培養24～48小時，使長成單層。 
2．取出蓋片，用PBS(pH7.2)輕輕沖洗蓋片表面去除殘渣。 
3．放入Carnoy固定液中固定l小時。 
4．浸入甲基綠一呱咯寧醋酸緩沖液中30分鐘染色。 
5．取出蓋片放入蒸餾水中輕輕漂洗2～3次(2～3秒鐘左右)，吸去水分。放入純丙酮中分色2～3秒鐘。 
6. 放入l／2丙酮+1／2二甲苯中5秒鐘。 
7．放入純二甲苯中透明5分鐘。 
8．滴一滴中性樹膠于載玻片上，將蓋片標本面朝下封片。 
9．鏡下觀察 
（三）結果 
細胞質被染成淺紅色，細胞核被染成藍綠色，而其中核仁被染成紫紅色（參照照片）。 
二、細胞內堿性蛋白和酸性蛋白的顯示 
（一）原理 
由于不同的蛋白質分子所帶的堿性和酸性基團的數目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白質分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下，整個蛋白質所帶負電荷多，則為酸性蛋白質；帶正電荷多，則為堿性蛋白質。據此，可將標本經三氯醋酸處理提出核酸后，用不同pH值的固綠染液分別染色，細胞內的酸性蛋白和堿性蛋白質顯示出來。 
（二）方法 
1．以破壞脊髓法處死蟾蜍，將其腹面向上放人蠟盤中，剪開胸腔，打開心包。小心將心臟剪一小口，取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端，推片，按此法制備二張血涂片，室溫晾干。 
2. 將涂片作好標記放在70％乙醇中固定5分鐘，室溫晾干。 
3．放入5％三氯醋酸中60℃30分鐘，抽提出核酸。 
4．清水沖洗多次（3分鐘以上），以沖去痕跡的三氯醋酸。 
5．濾紙吸干玻片上水分。 
6. 一張片放入0.1％堿性固綠(pH8.0～8.5)中染色10～15分鐘,另一張片放入0.1％酸性固綠(pH2.0～2.5)染色5～10分鐘。 
7．清水沖洗，蓋上蓋片鏡檢。