、zui有可能是你的培養(yǎng)液沒有去除干凈，因為培養(yǎng)液可以中止消化。所以建議用PBS沖洗兩次。然后再加EDTA.

2、加大EDTA的濃度 ，可以選擇0.1％與trypsin混合使用，加大以上溶液的體積，可以用2ml。

3、37度溫度要夠。

4、實時查看，當看到鏡下細胞折光度有改變，就是有作用，然后用培養(yǎng)液將細胞沖洗下來。

丁香園網(wǎng)友cherrypie的問題為：

現(xiàn)在我發(fā)現(xiàn)胰酶消化不下細胞，0.25%胰酶，我在培養(yǎng)箱里孵育了5min，竟然還貼壁貼的很好，實在沒辦法了。請各位高手幫幫忙吧，我怕消化時間長了對細胞有傷害，所以只能放棄消化，就吹打，可是大部分是吹不下來的。

丁香園網(wǎng)友xinglinzi的觀點為：

1、用冰D-Hank's液洗細胞兩次；

2、用剛解凍的冷的胰酶（注意不要37度孵育）1-2ml/100ml的培養(yǎng)瓶，開過口的和時間長的都不用。

我遇到過的情況和你的一樣，37度孵育的消化不動細胞，原因我也不清楚。用馬上解凍的效果特別好，1-2分鐘就可以了。我做的是A549細胞。