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豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒說明書

時間:2018/4/17閱讀:1014
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【參數(shù)說明】

中文名:豬血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒

中文別名:豬血管生成素1(ANG-1)ELISA Kit

供應(yīng)商:上海遠慕

規(guī)格:48t/96t

保存:2-8℃

有效期:6個月

銷售優(yōu)勢:量大從優(yōu)、質(zhì)量保證。

特點:敏感性高、特異性強、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便。

用途:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。

檢測種屬:大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨ELISA試劑盒等種屬。

常見ELISA試劑盒:白介素、選擇素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、干擾素、轉(zhuǎn)化生長因子、趨化因子、細胞因子受體、粘附分子、生長因子、凋亡因子等等。

 

【技術(shù)原理】

1、抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

2、結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。

3、酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。

4、受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

5、此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

6、加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復(fù)性好,以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。

 

【組織結(jié)構(gòu)】

1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心12分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心60分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液:1000×g離心32分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心33分鐘,取上清液。

5、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

【操作步驟】

1、編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)。

2、加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4、配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用。

5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘。

8、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

9、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

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