上海遠慕生物講述人5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒檢測說明及其他咨訊，本司現(xiàn)貨供應不同種屬ELISA試劑盒，提供免費代測服務，種屬有大鼠，小鼠，人，馬，猴，魚，羊，雞，兔，豬，狗，植物，牛，豚鼠及其他種屬等，品種齊全，價格實惠，歡迎訂購！

人5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒檢測說明

【信息說明】

中文名：人5核苷酸酶(5-NT)ELISA試劑盒

別名：人5核苷酸酶(5-NT)ELISA Kit

供應商：上海遠慕

規(guī)格：48T/96T

保存溫度：2-8℃低溫保存

有效期：6個月

試劑盒成分：酶標板，試劑，標準品等。

檢測原理：狗膽囊收縮素(CCK)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ABC-ELISA法

用途：用于測定血清，血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。

特點：敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。

實驗方法： 酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)

ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在檢測過程中除正常反應外，有時常見到一些錯誤的結果。

引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：

①標本因素;

②試劑因素;

③操作因素。

【成分配制】

1、預包被板: 96T/48T

2、酶標記抗體: (30倍濃縮)HRPIgG,親合純化 0.4mL x 1

3、標準品: -6 0.5mL x 2

4、EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

5、標記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

6、顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

7、終止液: 1N 12mL x 1

8、濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1

【樣本處理】

包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

1、血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

2、血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

3、尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4、細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并 放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5、組織標本：
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

【操作步驟】

1、編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)。

2、加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4、配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用。

5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7、顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘。

8、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

9、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)；測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

【注意事項】

1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物請避光保存。

7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9、本試劑不同批號組分不得混用。

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