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一、包被抗原的選擇
包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類.天然蛋白需經純化才能用直接吸附法包被,對于含雜質較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應的物質如抗體直接吸附在酶標板上,再通過特異性反應使抗原固相化).ELISA試劑盒經純化的重組蛋白一般皆可直接包板.小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物,由于分子量太小,往往難于直接吸附在酶標板上,一般都先使其與無關蛋白質如BSA等偶聯,偶聯物吸附于固相載體上。
二、包被液的選擇
一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條件下不穩定的話,也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
三、包被濃度的選擇
包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質變化,一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml,要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實驗來確定。
四、包被溫度的選擇
通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時,我們強烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的保持。
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