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質粒小量提取試劑盒常見問題與解析

時間:2020/10/30閱讀:1077
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質粒小量提取試劑盒常見從1~4mL菌液可以抽提到5~30?g的質粒,純度高,OD260/OD280比值一般為1.8-2.0之間,質粒可直接用于PCR、酶切、轉化測序和體外轉錄等后續實驗。那么在實驗過程中常見問題有哪些,下面跟小編一起來看一下。

 

質粒得率低可能原因及解決辦法:

1、菌體未活化,生長效率低,菌量少。需要活化菌種。

2、屬于低拷貝質粒,增加菌液的量。

3、SolutionB裂解不充分,室溫靜置5min。

4、后洗脫體積不夠,洗脫液不少于50?L。

質粒純度差可能原因:

1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。

2、加入SolutionB劇烈震蕩,使得基因組斷裂。

3、加入BufferN操作慢,形成微小沉淀,蛋白質無法被充分漂洗干凈。

4、BufferW2未加入無水乙醇。

5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之間,小于1.8可能有蛋白污染,大于2.0有部分降解或RNA污染。

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