人ELISA試劑盒現在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操縱的尺度化極為有利。
1.抗體的酶標記及質量鑒定
ELISA試劑盒收集*峰即為酶標抗體峰。標記完后用紫外分光光度計在分別在280nm、及403nm處測定酶標記物的A值，計算免疫球蛋白量、摩爾比值、酶結合率以及標記率。
2.包被用緩沖液及zui適包被抗原濃度的優化
a.包被緩沖液的優化
三種緩沖液作為包被液，抗原包被濃度為5ug/ml，及2.5ug/ml,酶標抗體工作濃度為1：400及1：300，用自動酶標儀分析，選擇*的包被緩沖液系統。
b.zui適抗原包被濃度的優化
顯色的強度在一定范圍內與包被的抗原量成正比，但隨著包被抗原濃度的增加，顯色的強度反而降低，我們選擇臨界包被值作為包被抗原量。
3.封閉液、洗滌液及保護液的優化
a.封閉液的優化
采用文獻報道的方法進行封閉，其封閉液的組成為：10mM磷酸鹽緩沖液含1%的牛血清白蛋白。
b.洗滌液的配制
采用文獻報道的方法配制洗滌液。
4.酶標板保護液的優化
在封閉完后加入保護液于4℃冰箱中孵育過夜，同時與未做保護的酶標板進行對照，然后將保護的及未保護的酶標板置于37烘箱中放置15天，考察保護液對酶標板的穩定性的影響。
5.酶標抗體稀釋度的優化
抗原包被濃度為4ug/ml,經孵育、洗滌后、顯色終止后，用自動酶標儀分析，選擇A值為1.5左右的酶標抗體稀釋度為zui適工作濃度。
6.酶標抗體保護液的優化
適當的緩沖液以及添加無關蛋白質、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會對對酶標抗體的活性起一定的保護作用，因此我們設計了一組保護劑用于保護酶標抗體，與未添加任何糖蛋白的酶標抗體做對照。
