DIY夾心法ELISA試劑盒常見(jiàn)技術(shù)指南：
1、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗，必須識(shí)別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對(duì)。
2、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的細(xì)節(jié)。ELISA試劑盒在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書(shū)中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
4、一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA試劑盒操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5、為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
6、若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。
7、當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.Galectin 1 半乳糖凝集素1抗體
phospho-IKK gamma (Ser31) 磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體
Phospho-IKK alpha (Thr23) 磷酸化KB抑制蛋白激酶α/IKK α 抗體
phospho-IKK beta(Tyr199) 磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體
phospho-IKK beta(Tyr188) 磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體
phospho-IKK alpha (Tyr463) 磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗體
phospho-IKK gamma (Ser376) 磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體
phospho-IKK beta(Ser466) 磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體
IFI6 干擾素alpha誘導(dǎo)蛋白6抗體
IL-17E/IL-25 白介素-17E抗體
phospho-IRS-1(Ser307) 磷酸化胰島素受體底物p-IRS-1/2抗體
IARS2 tRNA異*連接酶抗體
Integrin alpha 2/CD49b 整合素α2抗體
IFIT3 干擾素誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白3抗體
IFIT5 干擾素誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白5抗體
IFITM2 干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白2抗體
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