目前國(guó)內(nèi)外均有成功分離羊水來(lái)源干細(xì)胞的報(bào)導(dǎo)，ELISA試劑盒大多是利用羊水細(xì)胞貼壁的特點(diǎn)通過(guò)多次傳代的方法獲得干細(xì)胞。Tsai MS 等采用兩步培養(yǎng)法從孕中期羊水中成功分離出具有MSCs 特征的干細(xì)胞。隨后De Coppi 等通過(guò)免疫磁珠方法分離出c － Kit （ CD117） 陽(yáng)性細(xì)胞，這些細(xì)胞在體外增殖迅速，可以形成穩(wěn)定的細(xì)胞系，他將這些細(xì)胞命名為羊水干細(xì)胞。此外通過(guò)克隆化培養(yǎng)的方法也可以從羊水中獲得干細(xì)胞。ELISA試劑盒從現(xiàn)有研究情況看來(lái)，目前尚未形成統(tǒng)一的羊水干細(xì)胞培養(yǎng)體系。
本實(shí)驗(yàn)采用貼壁法分離獲得羊水細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞使用低糖DMEM 培養(yǎng)基。收集的20 例羊水標(biāo)本中有17 例原代培養(yǎng)成功，并獲得可以持續(xù)傳代的穩(wěn)定細(xì)胞系。培養(yǎng)的羊水細(xì)胞體外增長(zhǎng)迅速，ELISA試劑盒倍增時(shí)間約36h。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示細(xì)胞表達(dá)CD29、CD44、CD105 等間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志，不表達(dá)造血干細(xì)胞表面標(biāo)志CD45 和CD133。RT － PCR 的結(jié)果表明分離獲得的干細(xì)胞表達(dá)Oct － 4 和Nanog 基因，且不同代的細(xì)胞間均有表達(dá)。Oct － 4 和Nanog 被認(rèn)為是干細(xì)胞多能分化的主要調(diào)節(jié)因子，干細(xì)胞分化后其表達(dá)立即下調(diào)。以上結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致，表明羊水細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)擴(kuò)增可以得到具有MSCs 性質(zhì)的干細(xì)胞。
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