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脂蛋白磷脂酶a2試劑盒的操作步驟和技術(shù)原理

閱讀:456發(fā)布時(shí)間:2018-12-28

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脂蛋白磷脂酶a2試劑盒

操作步驟:

各試劑在使用前平衡至室溫。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。除空白孔外,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測樣品100ul,輕輕混勻,37℃,120分鐘。

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。

3. 每孔加檢測溶液A工作液 100ul,37℃,60分鐘。洗板3次,350ul/每孔,甩干。

4. 每孔加檢測溶液B工作液 100ul,37℃,60分鐘,洗板5次,甩干。

5. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯30分鐘。

6. 依序每孔加終止溶液50ul,終止反應(yīng)。用酶聯(lián)儀在910nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 

注:以上操作步驟為參考,具體操作步驟以ELISA試劑盒說明書為準(zhǔn)。

脂蛋白磷脂酶a2試劑盒 

技術(shù)原理:
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
(2). 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。
(3). 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
(4). 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。
(5). 此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。


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