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磷脂酶a2受體抗體試劑盒實驗原理及組成和配制

閱讀:232發布時間:2019-3-12

磷脂酶a2受體抗體試劑盒實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中sPLA2水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體往包被單抗的微孔中依次加入sPLA2抗原、*化的抗人SPLA2抗體、HRP標記的親和素,經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的SPLA2呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制

1.酶聯板:一塊(96孔)

2.標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后又反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2.000pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋2.000pg/ml,1.000pg/ml,500pg/ml,250pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,31.2pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0pg/ml,臨用前15分鐘內配制。

如配制1.000pg/ml標準品:取0.5ml 2.000pg/ml的上述標準品加入含有0.5pg/ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3.樣品稀釋液:1x20ml/瓶。

4.檢測稀釋液A:1x10ml/瓶。

5.檢測稀釋液B:1x10ml/瓶。

6.檢測溶液A:1x120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液A1:100稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100ul),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比列配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。

7.檢測溶液B:1x120ul/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。

8.底物溶液:1x10ml/瓶。

9.濃洗滌液:1x30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.終止液:1x10ml/瓶(2N H2so4)。


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