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上海一基實業有限公司
主營產品： 標準品,培養基,Elisa試劑盒 |
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2017-8-30 閱讀(260)
Annexin-V-EGFP細胞凋亡檢測試劑盒
細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定等方面起著十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一種分子量為35-36 KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）高親和力特異性結合。以融合蛋白Annexin Ⅴ-EGFP作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。
Propidium iodide（PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。將Annexin Ⅴ與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區分開來。
產品特色
簡便、快捷、準確。
成分
Annexin V-EGFP：12.5 µl
Propidium Iodide (PI) ：125 µl
1×Binding Buffer：12.5 ml
保存條件
2-8℃ 儲存，有效期一年。
使用方法
1.調整待測細胞的濃度為5×105個/ml；
2.取1 ml細胞，1000 rpm，4℃離心10分鐘，棄上清；
3.加入1 ml冷的PBS，輕輕震蕩使細胞懸浮；
4.1000 rpm，4℃離心10分鐘，棄上清；
5.重復步驟3、4兩次；
6.對于貼壁細胞，先用胰酶消化，再用PBS洗滌；
7.將細胞重懸于200 µl Binding Buffer；
8.加入0.5 µl Annexin V-EGFP和5 µl PI，輕輕混勻，避光室溫反應15分鐘 或4℃反應30分鐘。加入300 µl Binding Buffer，在1小時內上機檢測；
9.若用熒光顯微鏡檢測，將細胞混合液離心，取細胞沉淀涂片，再進行觀察。
操作注意要點
1.整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作；
2.反應完畢后請盡快檢測，因為細胞凋亡是一個動態的過程，反應1小時后熒光強度就開始衰變；
3.Annexin V-EGFP和Propidium iodide是光敏物質，在操作時請注意避光；
4.成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細胞類型、細胞膜上PS的密度、發生凋亡時PS翻轉的比例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時間等，把這些影響因素進行優化對實驗成功是非常必要的；
5.在細胞洗滌的zui后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果；
6.PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-EGFP染色，上機前5分鐘再加入PI染色。
注意事項
1.為保證得到理想的實驗結果，在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項；
2.試劑（尤其是小瓶裝的試劑）在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落；
3.Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用；
4.此試劑盒僅供科研使用，不宜用于臨床診斷；
5.細胞的洗滌同常規方法。
