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SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞；WI38/VA13使用說明書

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更新時間：2017-01-19 16:37:20瀏覽次數(shù)：190次

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產(chǎn)品簡介

SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞；WI38/VA13使用說明書，細胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養(yǎng)實驗室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細介紹

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞；WI38/VA13使用說明書
形態(tài)特性   上皮細胞樣
生長特性貼壁生長
特征特性   該細胞1964年建系，源自3個月胎齡的女性胚胎的肺成纖維細胞，經(jīng)SV-40轉(zhuǎn)化。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:2～1:10傳代，每周換液2次
傳代情況 C2
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測培養(yǎng)法（-）
STR
同工酶
染色體   45～89
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細胞；WI38/VA13使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復蘇操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
GP-BB(Human Glycogen phosphorylase BB) ELISA Kit 人糖原磷酸化酶同工酶BB   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Lp- Alpha(Human lipoprotein Alpha) ELISA Kit 人脂蛋白α   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Cr(Human Crosslaps) ELISA Kit 人骨膠原交聯(lián)   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
C I CP(Human cross-linked C-opeptides of Type I collagen) ELISA Kit 人Ⅰ型前膠原C末端肽   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
DPD(Human deoxypyridinoline) ELISA Kit 人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PY(Human pyridinium crosslink/PyriLinks) ELISA Kit 人吡啶交聯(lián)物   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
OPN(Human Osteopontin) ELISA Kit 人骨橋素   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
GABA(Human Gamma-aminobutyric acid) ELISA Kit 人γ氨基丁酸   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
SP-R(Human substance P receptor) ELISA Kit 人P物質(zhì)受體   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
cGMP(Human Cyclic guanosine monophosphate) ELISA Kit 人環(huán)磷酸鳥苷   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Lp-PL-A2(Human lipoprotein-associated phospholipase A2) ELISA Kit 人脂蛋白磷脂酶A2   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
EL(Human Endothelial lipase) ELISA Kit 人內(nèi)皮脂肪酶   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48TGalectin-3   英文名稱：   半乳糖凝集素3抗體   ?0.1ml
GRB7   英文名稱：   生長因子受體結(jié)合蛋白7抗體   ?0.1ml
GLT1D1   英文名稱：   糖基轉(zhuǎn)移酶1結(jié)構(gòu)域1抗體   ?0.2ml
GPCR LGR7   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體LGR7蛋白抗體   ?0.2ml
GPCR MRGX2    英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體MRGX2蛋白抗體   ?0.2ml
GPCR RDC1   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體RDC1蛋白抗體   ?0.2ml
GPCR TAS1R1   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體TAS1R1蛋白抗體   ?0.2ml
GPCR TGR7   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體TGR7蛋白抗體   ?0.2ml
GPR157   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體GPR157蛋白抗體   ?0.2ml
GPR176   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體GPR176蛋白抗體   ?0.2ml
GPR10    英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體GPR10蛋白抗體   ?0.2ml
GPCR C5L2    英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體C5L2蛋白抗體   ?0.2ml
GPCR EX33    英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體EX33蛋白抗體   ?0.2ml