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人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5使用說(shuō)明書

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5使用說(shuō)明書，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5使用說(shuō)明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 人胚肺成纖維細(xì)胞；MRC-5使用說(shuō)明書
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性   MRC-5細(xì)胞系來(lái)自14周齡男性胎兒的正常肺組織，該細(xì)胞老化前能傳代42到46次群體倍增。它是正常二倍體細(xì)胞系，46，XY核型。模式染色體數(shù)為46，概率為70%。此細(xì)胞系為2003年6月引進(jìn)
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法   消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 P（16+5）
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
SP-40(Human Heat Shock Protein 40) ELISA Kit 人熱休克蛋白40   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
HSP-20(Human Heat Shock Protein 20) ELISA Kit 人熱休克蛋白20   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MYS(Human Myosin) ELISA Kit 人肌球蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
GS(Human Gelsolin) ELISA Kit 人凝溶膠蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
CRP(Human C-Reactive Protein) ELISA Kit 人C反應(yīng)蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ALD(Human aldosterone) ELISA Kit 人醛固酮   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
MYO/MB(Human Myoglobin) ELISA Kit 人肌紅蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
cTn- I (Human cardiac troponin I ) ELISA Kit 人心肌肌鈣蛋白Ⅰ   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Tie1(Human tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 1) ELISA kit 人血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域*激酶1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ANG-2(Human Angiopoietin 2) ELISA Kit 人血管生成素2   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
ANG-1(Human Angiopoietin 1) ELISA Kit 人血管生成素1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T2 and S phase expressed 1   英文名稱：   G2期/S期應(yīng)答相關(guān)蛋白1抗體   ?0.2ml
phospho-GATA4 (Ser262)   英文名稱：   磷酸化GATA結(jié)合蛋白4抗體   ?0.1ml
GATA6   英文名稱：   GATA結(jié)合蛋白6抗體   ?0.1ml
GLP-1(1G9)   英文名稱：   GLP-1單克隆抗體   ?0.1ml
Granzyme B   英文名稱：   顆粒酶B抗體   ?0.1ml
GPR30   英文名稱：   G蛋白偶聯(lián)受體30抗體   ?0.1ml
GDAP2   英文名稱：   *誘導(dǎo)分化相關(guān)蛋白2抗體   ?0.2ml
GAPDH   英文名稱：   3-磷酸甘油醛脫氫酶   ?0.1ml
GDNFRA   英文名稱：   GDNF家族受體α-1抗體   ?0.1ml
Gemin 2   英文名稱：   運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗體   ?0.1ml
GLUT1   英文名稱：   葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體   ?0.1ml
GLUT2   英文名稱：   葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體   ?0.1ml