【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人羊膜細胞；WISH使用說明書
形態特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 zui初以為這株細胞的起源是正常羊膜，但隨后通過同工酶分析、HeLA標記染色體和DNA指紋法分析，它的起源是HeLa細胞污染的。 角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 注意： 這株細胞包含HeLa標記染色體，是從HeLa污染細胞中建株的。
培養條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優質胎牛血清，10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。
傳代情況 P(170+5)
凍存條件 *培養基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 B類
復蘇操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Glycerol kinase 英文名稱： 甘油激酶抗體 ?0.2ml
GPD2 英文名稱： 線粒體甘油三磷酸脫氫酶2抗體 ?0.2ml
Glutamine synthetase 英文名稱： *合成酶/*氨連接酶抗體 ?0.1ml
GPD1 英文名稱： 甘油三磷酸脫氫酶1抗體 ?0.2ml
ganglioside GM1 英文名稱： 神經節苷酯抗體 ?0.1ml
GSTA3 英文名稱： *S轉移酶A3抗體 ?0.1ml
phospho-GADD153 (Ser30) 英文名稱： 磷酸化GADD153抗體 ?0.1ml
G protein alpha S 英文名稱： G蛋白αS抗體（*核苷酸結合蛋白Gα s） ?0.2ml
G protein beta 4 英文名稱： G蛋白β4抗體/*核苷酸結合蛋白β亞基4 ?0.2ml
G protein beta 2 英文名稱： G蛋白β2抗體/*核苷酸結合蛋白β亞基2 ?0.2ml
GNG2 英文名稱： G蛋白γ2抗體/*核苷酸結合蛋白γ2抗體 ?0.1mlATM(Human Ataxia angiectasia mutated) ELISA Kit 人毛細血管擴張共濟失調突變基因 Multi-class antibodies 規格： 48T
AhR(Human aryl hydrocarbon receptor) ELISA Kit 人芳香烴受體 Multi-class antibodies 規格： 48T
SMAF(Human Specifie Macrophage Arming Paetot) ELISA Kit 人特異巨噬細胞武裝因子 Multi-class antibodies 規格： 48T
MF/MPF(Human maturation promoting factor) ELISA Kit 人促有絲分裂因子 Multi-class antibodies 規格： 48T
ATF-1(Human activating transcription factor-1) ELISA Kit 人轉錄因子抗體-1 Multi-class antibodies 規格： 48T
HAMA(Human antimous antibody) ELISA 人抗鼠抗體 Multi-class antibodies 規格： 48T
VGCC(Human voltage-gated calcium channel) ELISA Kit 人鈣離子通道抗體 Multi-class antibodies 規格： 48T
BrdU(Human Bromodeoxyuridine) ELISA Kit 人溴脫氧核苷* Multi-class antibodies 規格： 48T
FSP(Human Fibroblast surface protein) ELISA Kit 人纖維母細胞表面抗原 Multi-class antibodies 規格： 48T
SLPI(Human secretory leukocyte protease inhibitor) ELISA Kit 人分泌白細胞蛋白酶抑制因子 Multi-class antibodies 規格： 48T
POMC(Human pro-opiomelanocortin) ELISA Kit 人阿黑皮素原 Multi-class antibodies 規格： 48T
