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人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞；WI-38 VA13亞系2RA使用說明書

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人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞；WI-38 VA13亞系2RA使用說明書，細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞；WI-38 VA13亞系2RA使用說明書
形態(tài)特性   成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞系衍生自WI-38細(xì)胞。WI-38細(xì)胞感染低滴度的SV40病毒，經(jīng)過連續(xù)傳代、克隆選擇獲得多株亞系，其中2RA亞系含有SV40 neo (T)和轉(zhuǎn)移抗原，從而改變其有限細(xì)胞系的特性，可在常規(guī)條件下連續(xù)傳代。該細(xì)胞系的實(shí)驗(yàn)操作甚少在生物安全P2級(jí)條件下進(jìn)行。
培養(yǎng)條件   MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C265
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR   STR鑒定
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類

產(chǎn)品名稱	人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞；WI-38 VA13亞系2RA使用說明書
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
GCP6   英文名稱：   γ-微管蛋白GCP6抗體   ?0.2ml
GCS1   英文名稱：   β-葡萄糖苷酶1抗體   ?0.2ml
GCSH   英文名稱：   *裂解系統(tǒng)H蛋白抗體   ?0.2ml
GDPGP1   英文名稱：   15號(hào)染色體開放閱讀框58抗體   ?0.2ml
Genethonin 1   英文名稱：   淀粉結(jié)合域蛋白1抗體   ?0.2ml
GFM1   英文名稱：   延伸因子G1抗體   ?0.2ml
GBA2   英文名稱：   β葡萄糖苷酶2抗體   ?0.2ml
GBA3   英文名稱：   β葡萄糖苷酶3抗體   ?0.2ml
GBAS   英文名稱：   膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相關(guān)蛋白GBAS抗體   ?0.2ml
GBGT1   英文名稱：   紅細(xì)胞糖苷α1抗體   ?0.2ml
GBP1   英文名稱：   G蛋白結(jié)合蛋白1抗體   ?0.2ml
GBP4   英文名稱：   G蛋白結(jié)合蛋白4抗體   ?0.2ml
GBP6   英文名稱：   G蛋白結(jié)合蛋白6體   ?0.2mlEL(Human EuglobulinLysis) ELISA Kit 人優(yōu)球蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
f-Hb(Human free haemoglobin) ELISA Kit 人游離血紅蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PRM1(Human Protamine 1) ELISA Kit 人*1   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
HbCO(Human carboxyhemoglobin) ELISA Kit 人一氧化碳血紅蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PAIg(Human plaet-associated immunoglobulins) ELISA Kit 人血小板相關(guān)免疫球蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
PAC3(Human plaet-associated Complement 3) ELISA Kit 人血小板相關(guān)補(bǔ)體3   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
TX-A2(Human Thromboxane A2) ELISA Kit 人血栓素A2   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
HbH(Human Hemoglobin H) ELISA Kit 人血紅蛋白H   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
HbC(Human Hemoglobin C) ELISA Kit 人血紅蛋白C   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
Human Fibrin ELISA Kit 人纖維蛋白   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T
FPB(Human fibrinopeptide B) ELISA Kit 人血纖肽/纖維蛋白肽B   Multi-class antibodies   規(guī)格：   48T