抗人VEGF鼠源單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；VEGF-MmAb-C14C5培養(yǎng)

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

抗人VEGF鼠源單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；VEGF-MmAb-C14C5培養(yǎng)細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱	抗人VEGF鼠源單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；VEGF-MmAb-C14C5培養(yǎng)
貨期	3－5天
發(fā)貨地	上海

細(xì)胞名稱 抗人VEGF鼠源單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞；VEGF-MmAb-C14C5培養(yǎng)
形態(tài)特性   淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性半貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開(kāi)。
培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限未定

復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
Stabilin 2   清道夫受體STAB2抗體
STRA6   維甲酸誘導(dǎo)蛋白6抗體
Sclerostin   骨形態(tài)發(fā)生抑制蛋白SOST抗體
Sarcomeric Alpha Actinin   α橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白/α-SCA抗體
SCUBE3   新型分泌細(xì)胞表面蛋白/成骨細(xì)胞相關(guān)蛋白SCUBE3抗體
SCUBE2   內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE2抗體
Sulfite oxidase   亞硫酸鹽氧化酶抗體
Somatostatin   *抗體
phospho-Syntaxin 1a(Ser188)   磷酸化突觸融合蛋白1抗體
SCD1   固醇酰*脫氫酶1抗體
SNF2L   解旋酶SNF2L抗體
Sorbitol Dehydrogenase   *脫氫酶抗體蘿卜樹(shù) Helicia essatia Hook   Helicianeoide B   豆腐果新苷B   496066-89-8   C32H38O20   ≥98%
羅漢松Podocarpus macrophyllus   Abietic acid   松香酸   514-10-3   C20H30O2   ≥95%
羅漢松Podocarpus macrophyllus   4β-Carboxy-19-nortotarol   4β-羰基-19-去甲基陶塔酚   55102-39-1   C20H28O3   ≥95%
羅漢松Podocarpus macrophyllus   2,3-Dihydroheveaflavone   none   110382-42-8   C33H26O10   ≥95%
羅漢松Podocarpus macrophyllus   2,3-Dihydroisoginkgetin   none   828923-27-9   C32H24O10   ≥95%
羅漢松Podocarpus macrophyllus   2,3-Dihydrosciadopitysin   2，3―二氫金松素   34421-19-7   C33H26O10   ≥95%
羅漢果 Momordica grosvenori Swingle   Siamenoside I   翅子羅漢果I   126105-12-2   C54H92O24   ≥98%
輪環(huán)藤Cyclea tonkinensis Gagnep.   Cycleanine   輪環(huán)藤堿   518-94-5   C38H42N2O6   ≥98%
欒樹(shù)Koelreuteria paniculata Laxm   Methyl gallate   沒(méi)食子酸甲酯   99-24-1   C8H8O5   ≥98%
欒樹(shù)Koelreuteria paniculata   Ethyl gallate   沒(méi)食子酸乙酯   831-61-8   C9H10O5   ≥98%
葎草Humulus scandens   Glyasperin A   粗毛甘草素 A   142474-52-0   C25H26O6   ≥97%

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