原代細(xì)胞操作方法
雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過一夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過一夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；
4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.’zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
發(fā)展前景
臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。分子生物學(xué)正在并zui終肯定會讓對整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)全面而*的認(rèn)識，其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性
原代細(xì)胞10 µg 人小腦顆粒細(xì)胞總RNA HCGC tRNA
10 µg 人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞總RNA HN-h tRNA
10 µg 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞總RNA HOPC tRNA
10 µg 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(懸浮生長)總RNA HOPC-os tRNA
10 µg 人雪旺細(xì)胞總RNA HSC tRNA
10 µg 人神經(jīng)束膜細(xì)胞總RNA HPC tRNA
10 µg 人星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNA HA tRNA
10 µg 人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNA HA-c tRNA
10 µg 人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNA HA-sp tRNA
10 µg 人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞總RNA HA-h tRNA
10 µg 人小膠質(zhì)細(xì)胞總RNA HM tRNA
10 µg 人微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNA HDMEC tRNA
10 µg 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞總RNA HDLEC tRNA
10 µg 人表皮角質(zhì)細(xì)胞總RNA HEK tRNA
10 µg 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-成人總RNA HEK-a tRNA
10 µg 人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素總RNA HEM-l tRNA
10 µg 人表皮黑色素細(xì)胞-中色素總RNA HEM-m tRNA
10 µg 人表皮黑色素細(xì)胞-深色素總RNA HEM-d tRNA
10 µg 人成纖維細(xì)胞-胎兒總RNA HDF-f tRNA
10 µg 人成纖維細(xì)胞-新生兒總RNA HDF-n tRNA
10 µg 人成纖維細(xì)胞-成人總RNA HDF-a tRNA
10 µg 人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞總RNA HHGMC tRNA
10 µg 人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞總RNA HLEC tRNA
10 µg 人淋巴成纖維細(xì)胞總RNA HLF tRNA
10 µg 人口腔角質(zhì)細(xì)胞總RNA HOK tRNA
10 µg 人牙齦成纖維細(xì)胞總RNA HGF tRNA
10 µg 人牙周膜成纖維細(xì)胞總RNA HPLF tRNA
10 µg 人食道上皮細(xì)胞總RNA HEEpiC tRNA
10 µg 人食道平滑肌細(xì)胞總RNA HESMC tRNA
10 µg 人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNA HIMEC tRNA
10 µg 人腸平滑肌細(xì)胞總RNA HISMC tRNA
10 µg 人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞總RNA HCSMC tRNA原代細(xì)胞
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