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原化細胞操作步驟

閱讀:154發(fā)布時間:2017-06-26

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原化細胞檢測原理
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被神經(jīng)肽S(NPS)透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中神經(jīng)肽S(NPS)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中神經(jīng)肽S(NPS)含量。
操作步驟
1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加*40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
7、溫育:重復4的操作。
8、洗板:重復5的操作。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。
10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
原化細胞5 ml    間充質(zhì)干細胞脂肪細胞分化生長添加物    MADS
5 ml    間充質(zhì)干細胞生長添加物    MSCGS
5 ml    間充質(zhì)干細胞生長添加物-無血清    MSCGS-2
5 ml    間充質(zhì)干細胞生長添加物-無動物成分    MSCGS-acf
5 ml    間充質(zhì)干細胞軟骨細胞分化生長添加物    MCDS
10 ml    胎牛血清    FBS
25 ml    胎牛血清    FBS
100 ml    */EDTA消化液    T/E
100 ml    *中和液    TNS
100 ml     非酶細胞裂解液    NECDS
50 ml    細胞凍存液    CFM
50 ml    無血清細胞凍存液    SF-CFM
50 ml    臺盼藍    TB
500 ml    磷酸鹽緩沖注    DPBS
500 ml    *    HBSS
1 ml    多聚賴氨酸 1 mg/ml    PLL
1 ml    多聚賴氨酸10 mg/ml    PLL
500 ml    胎牛血清    FBS
5 ml    */*溶液    P/S
100 ml    */*溶液    P/S
50 ml    抗真菌溶液    AMS
50 ml    抗霉菌溶液    ABAMS
500 ml    細胞培養(yǎng)超純水    CCGW
100 ml    肌細胞分離液    MDS
25 mg    牛腦垂體提取物    BPE
100 mg    牛腦垂體提取物    BPE
10 ml    胰島素鐵硒傳遞蛋白 100x    ITS
100 ml    非必需氨基酸 100X    NEAA
1mg    纖維粘連蛋白-牛源    BPF
48 tests/48 well plate    I 型膠原細胞檢測試劑盒    Col
48 tests/48 well plate    纖維母細胞粘附檢測試劑盒    Fibro
1000 tests/96 well plate    MTT細胞活力和增殖檢測試劑盒    MTT原化細胞

 


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