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隨機引物法 DNA 探針標記試劑盒5次實驗方法

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更新時間:2017-01-16 12:10:50瀏覽次數:400次

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產品簡介

隨機引物法 DNA 探針標記試劑盒5次實驗方法運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

隨機引物法 DNA 探針標記試劑盒5次實驗方法使用方法: 
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶(10 U/μL) 1 μL 滅菌的超純水 補足到 25 μL 注:5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第
8 步之后進行。
隨機引物法 DNA 探針標記試劑盒5次實驗方法產品介紹:

酸化反應標記:
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑:TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等 2. 在微量離心管中制備下列反應液: 成分 加入的體積 自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl,pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶 (CIAP,10~20 U/μL)
2 μL 滅菌的超純水 補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//(25:24:1),充分混勻。
5. 離心,取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4~5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl(zui終濃度 150 mM)。
8. 加入 375 μL(2.5 倍量)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
9. 離心回收沉淀,用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后,沉淀真空干燥。 10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
隨機引物法 DNA 探針標記試劑盒5次磷酸化反應(前反應):
1. 在微量離心管中制備下列反應液:


2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記:
當摻入水平很低的時候,需要使用本步驟,即通過體積排阻色譜或過濾試 劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入 的 dNTPs 效果很好,它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5~10 分鐘以使 T4 多 聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個 堿基的寡核苷酸。

AFAP 英文名稱: 微絲相關蛋白1抗體  0.2ml
ADORA1 英文名稱: 腺苷A1A受體抗體  0.2ml
ARSB 英文名稱: 芳基硫酸酯酶B抗體  0.2ml
ABAT 英文名稱: γ氨基丁酸轉氨酶抗體  0.1ml
A2BP1 英文名稱: 共濟失調蛋白2結合蛋白1抗體  0.2ml
ADAM17 英文名稱: 腫瘤壞死因子α轉換酶  0.1ml
ARNT2  英文名稱: 芳香烴受體核轉錄蛋白2抗體  0.2ml
ABH8 英文名稱: AlkB同源蛋白8抗體  0.2ml
ABI3BP 英文名稱: ABI基因家族成員3結合蛋白抗體  0.2ml
ARHGAP20 英文名稱: Rho GTP酶激活蛋白20抗體  0.2ml
ASB10 英文名稱: 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體  0.1ml
ALDH1L1 英文名稱: 乙醛脫氫酶1蛋白家族L1抗體  0.1ml
Axin 2 英文名稱: 軸抑制蛋白2抗體  0.2ml
ANGPTL6 英文名稱: 血管生成素相關蛋白6抗體  0.2ml
AMH 英文名稱: Muellerian繆勒管激素抑制因子抗體  0.2ml
EphA8 英文名稱: *蛋白激酶受體A8抗體  0.2ml
Acetoacetyl-CoA synthetase 英文名稱: 脂肪酰*家族成員1抗體  0.2ml
ARNTL2 英文名稱: 芳香烴受體核轉錄蛋白樣2抗體  0.2ml
phospho-AANAT (Thr29) 英文名稱: 磷酸化芳香胺N-乙酰化轉移酶抗體  0.1ml
ABLIM1 英文名稱: 肌動蛋白結合蛋白1抗體  0.2ml
AMIGO2 英文名稱: 粘附分子IgG樣結構域蛋白2抗體  0.2ml
Advillin 英文名稱: 肌動蛋白結合蛋白DOC6抗體  0.2ml
AFG3L2 英文名稱: AFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟失調蛋白28抗體  0.2ml

小鼠CXCR4(mouse CXCR-4) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠皮質酮(mouse Corticosterone) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠環氧化酶-2 (mouse COX-2) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠結締組織生長因子(mouse CTGF) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4 (mouse CTLA-4) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠細胞色素P450(mouse Cytochrome P450) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠C反應蛋白(mouse CRP) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠CXC趨化因子受體3(mouse CXCR3) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠CXC趨化因子配體16(mouse CXCL16) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠CXCL1/KC(mouse KC) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠*(mouse cAMP) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠環磷酸鳥苷(mouse cGMP) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠睫狀神經營養因子(mouse CNTF) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠可溶性CD36分子(mouse sCD36) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠sCD40配體(mouse sCD40 Ligand) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠CD34(mouse CD34) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(mouse sCD40L) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠補體C3a(mouse C3a) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠補體C5a(mouse C5a) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠血清總補體(mouse CH50) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠肌酸激酶(mouse CK) ELISA 48T/96T 進口分裝
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse CK-MB) ELISA 48T/96T 進口分裝 


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