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即用型多重 PCR 試劑盒50 次原理

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更新時間:2017-01-19 14:40:14瀏覽次數:541次

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產品簡介

即用型多重 PCR 試劑盒50 次原理運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

即用型多重 PCR 試劑盒50 次原理產品介紹:

即用型多重 PCR 試劑盒50 次原理產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

C29H20ClN7O11S3=774.16
〖級別〗:試劑級
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:藍色粉末
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
甲酚紅
〖英文名稱〗:Cresol Red;o-Cresolsulfonphthalein;4,4'-(3H-2,1-Benzoxathiol-3-ylidene)bis(2-methylphenol) S,S-dioxide
〖其他名稱〗:鄰甲酚紅;鄰甲酚磺酰酞;鄰甲酚磺酞;鄰甲磺酞;鄰甲酚磺酜酞
〖CAS號〗:1733-12-6
C21H18O5S=382.43
〖級別〗:IND
pH變色域:6.5(黃)~8.5(紫)
zui大吸收波長λ1(pH 6.5):432~436 nm
zui大吸收波長λ1(pH 8.5):571~574 nm
質量吸收系數α1(λ1,pH 6.5,干樣):49.0~67.0L/cm·g

瓊脂糖    超雜交液 ( 芯片 )
蛋白酶 K 干粉    超雜交液 ( 原位雜交 )
大提無內毒素質粒 DNAout    脫脂奶粉 ( 雜交 )
大提無內毒素質粒 DNAout    鯡魚精 DNA 溶液
一站式全血 mRNAout    Red-Taq DNA 聚合酶
酵母化學感受態細胞制備試劑盒    Long-Taq DNA 聚合酶
酵母化學感受態細胞制備試劑盒 ( 含轉化液 )    miRNA cDNA *鏈合成試劑盒
酵母電轉感受態細胞制備試劑盒    dATP 溶液,2.5mM
真菌總蛋白質微量提取試劑盒    dTTP 溶液,2.5mM
SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )    dGTP 溶液,2.5mM
SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )    dCTP 溶液,2.5mM
SDS-PAGE 上樣液,5×    dCTP 溶液,100mM
SDS-PAGE 上樣液,5×    dITP 溶液,2.5mM
一站式 Tricin


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