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10nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗方法

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更新時間:2017-01-19 15:02:34瀏覽次數:469次

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產品簡介

10nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗方法運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。

詳細介紹

10nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗方法合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
10nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗方法按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。

10nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗方法產品及特點:

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。

〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)生物染色。指示劑
〖保存〗:RT
普魯士藍
〖英文名稱〗:Prussian Blue;Ferric ferrocyanide;Ferric hexacyanoferrate(II);Chinese blue;Milori blue;Steel blue;Pigment blue 27;Hamburg blue;Berlin blue;Mineral blue
〖其他名稱〗:六合〖鐵〗(II)酸〖鐵〗;普魯士蘭;中國藍;貢藍;〖鐵〗藍;礦藍;柏林藍;亞〖鐵〗化〖鐵〗;華藍;密羅里藍;深藍
〖CAS號〗:14038-43-8
Fe4[Fe(CN)6]3=859.23
〖級別〗:BS
生物染色試驗:合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:深藍色粉末或塊狀。250℃失去全部水分而部分分解。幾乎不溶于水、稀酸及有機溶劑。新制成品可溶于草酸溶液。通常為含有一些〖水份〗和一些堿金屬的亞〖鐵〗化物。〖相對密度〗 1.80。
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)細菌血清檢驗中制備中國藍瓊脂培養基時作指示劑(配100毫升溶液用1克)。生物標本著色。氣體中除去硫化氫。
〖保存〗:RT
2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-(二乙氨基)*
〖英文名稱〗:5-Br-PADAP;Bromo-PADAP;2-(4-Diethylamino-2-hydroxyphenylazo)-5-bromopyridine
〖其他名稱〗:2-(4-乙氨基-2-羥基苯偶氮)-5-溴吡啶;(5-溴-2-吡啶)偶氮-5-(二乙氨基)*;溴代2-吡啶基-二乙氨基*
〖CAS號〗:14337-53-2 

10nt 隨機引物,0.5μg/μL5μg實驗方法細菌 DNAout    小鼠抗 Flag 標簽單抗
細菌 DNAout    小鼠抗 c-Myc 標簽單抗
柱式腐殖酸清除劑    小鼠抗 c-Myc 標簽單抗
柱式腐殖酸清除劑    小鼠抗 HA 標簽單抗
柱式細菌 DNAout    小鼠抗 HA 標簽單抗
柱式細菌 DNAout( 含* )    小鼠抗 GST 標簽單抗
可保種型藍白 T 載體    小鼠抗 GST 標簽單抗
PCR 抑制物清除劑    小鼠抗 V5 標簽單抗
中草藥 DNAout    小鼠抗 V5 標簽單抗
中草藥 DNAout    小鼠抗 MBP 標簽單抗
一步式細菌 DNAout    小鼠抗 MBP 標簽單抗
柱式無內毒素質粒 DNAout    小鼠抗 GFP 標簽單抗
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制劑    小鼠抗 GFP 標簽單抗
RNase-free Tris HCl,1M,pH 7.0    小鼠抗 mCherry 標簽單抗
RNase-free T


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