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上海邦景實業(yè)有限公司
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閱讀:128發(fā)布時間:2017-12-11
顆粒培養(yǎng)基檢測要點
1.仔細閱讀說明書 確定試劑盒在有效期內(nèi)。
2.按說明書確定所有試劑齊全,以及所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等。
3.標本制備要規(guī)范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者,注意低溫保存。
4.按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑。
5.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
6.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的Elsia操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
標本的收集和保存
用于大鼠ELISA試劑盒測定的標本*為常用的是血清(漿),有時因為特定的檢測目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集,要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點之間,會有一峰值出現(xiàn):生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,在測定此類激素時,有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測定值。又如當從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r,血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測,應根據(jù)藥代動力學選擇服藥后的*適時間抽血檢測。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢測的血清標本的收集則沒有時間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮以下幾個方面:
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的人ELISA試劑盒測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
(5)標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。
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