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閱讀:158發(fā)布時間:2018-2-10
顆粒培養(yǎng)基方具體請參照以下步驟:
1.洗滌液:使用前配制好,有的試劑盒說明書會標明,配制好的洗滌液,在4度的條件下一般可以存放一個月;如果試劑盒說明書沒有標明,盡量用新鮮的洗滌液,不需要多配制;
2.顯色液:顯色液一般分A液和B液,使用前15分鐘配制好;
3.標準品:大部分ELISA試劑盒中的標準品是已經(jīng)配制好的;還是4度保存,有的是需要現(xiàn)配制的,按照試劑盒說明書進行操作;
4.濃縮*結合的二抗和HRP:如果需要配制,試劑盒說明書沒注明配好可以保存多久的話,盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,還是一樣,使用前15分鐘配制;原則上是試劑盒說明書上沒有指出配制物的儲藏方式的話,應該現(xiàn)配現(xiàn)用;這個千萬不要怕麻煩;還有小瓶的管子開蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠用;
5.加 樣:室溫溫育的試劑,特別是溫育時間比較短的實驗操作的試劑,加樣對數(shù)據(jù)的影響比較大,特別要注意加樣問題。
測定步驟:
1.隨著病情的進展或由其他因素影響,某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動,因此有必要對標本進行預處理,例如對血清標本作適當稀釋,或離心分離血脂等。間接法測定中,標本適當稀釋還可降低非特異性反應。
2.加樣一般使用加液器,在ELISA中一般有4次加樣:加標本、加酶結合物、加底物和加終止液。加標本時必須每份標本使用一支移液器吸嘴,以免交叉污染。加酶結合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴。
3.在成批手工檢測中,還應注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異,使抗原抗體反應和酶促反應時間不一致,對競爭法及定量檢測影響很大,不注意可能會導致錯誤結果或定量不準。
4.洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關鍵步驟。目的是除去未結合的免疫反應物,終止抗原抗體反應,除去標本中與反應無關的成分、游離的酶標物以及反應過程中吸附于固相載體上的非特異性物質。可用洗板機洗板或手工洗板,前者洗滌質量較好,各反應孔洗滌效果均一,批內(nèi)、批間差異小,手工洗板應注意控制各孔洗滌效果,差異不宜太大。
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