駱駝科產(chǎn)生由 2 條重鏈和 2 條輕鏈組成的常規(guī)抗體，這些抗體與 Y 形的二硫化物鍵結(jié)合在一起。然而，它們也產(chǎn)生免疫球蛋白G的獨(dú)-特亞類，也稱為重鏈IgG（hcIgG）。

這些抗體僅由兩條沒有CH1區(qū)域的重鏈和在其N末端的抗原結(jié)合域（稱為VHH）組成。

hcIgG的獨(dú)-特之處在于其單體抗原結(jié)合區(qū)（VHH）能夠結(jié)合具有特異性、親和力，尤其是多樣性的抗原，與傳統(tǒng)抗體相當(dāng)，而無需與其他區(qū)域配對。使用分子工程可以產(chǎn)生VHH碎屑。

為什么要使用艾美捷Covalab VHH片段？

結(jié)合隱藏的表位：

它們的空間位阻減少，使它們能夠到達(dá)傳統(tǒng)抗體無法獲得的難以獲得的抗原，例如酶的活性位點(diǎn)（有助于抑制酶活性）以及較小的酶，例如溶-菌-酶或核糖核酸酶。

更好的滲透性：

與傳統(tǒng)抗體相比，它們穿透組織的能力增強(qiáng)，在進(jìn)行免疫組織化學(xué)時(shí)可以更精確地對組織切片進(jìn)行染色。

更穩(wěn)定：

VHH區(qū)域的高再折疊能力使它們在熱力學(xué)上更加穩(wěn)定，并能抵抗高溫（高達(dá)70°C / 158°F）和極-端pH值，如胃酸。

Covalab艾美捷丨VHH開發(fā)：

1-駱駝免疫接種

免疫：

根據(jù)Covalab的 88 天方案，免疫步驟包括 4 次注射和 2 次測試出血。

監(jiān)測：

免疫反應(yīng)性通過為該項(xiàng)目開發(fā)的檢測方法進(jìn)行監(jiān)測。

2-噬菌體文庫構(gòu)建

PBMCs分離和RNA提取：

從最終出血中分離外周血單核細(xì)胞（PBMC）并提取總RNA。

cDNA合成和VHH擴(kuò)增：

RT-PCR 和 VHH 抗體片段擴(kuò)增

特異性引物設(shè)計(jì)用于在VHH編碼區(qū)域內(nèi)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，第二次嵌套PCR允許cDNA擴(kuò)增。

噬菌體載體克隆：

VHH編碼基因被整合到噬菌體載體中，然后用于轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌以產(chǎn)生噬菌體文庫。

3-平移

目標(biāo)交互：

將抗原固定在微量滴定板孔的底部，將噬菌體制劑加載到孔中，使其通過在其表面表達(dá)的VHH結(jié)合抗原。

放大：

洗掉未結(jié)合的噬菌體后，剩余的噬菌體被轉(zhuǎn)導(dǎo)成感受態(tài)細(xì)菌進(jìn)行富集和擴(kuò)增。

選擇：

在每個(gè)淘選階段結(jié)束時(shí)，分離編碼抗原特異性VHH的cDNA

4- 生產(chǎn)和凈化

表達(dá)載體中的亞克隆：

插入片段被整合到表達(dá)載體中，然后用于轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌。

培養(yǎng)、裂解和親和色譜純化：

通過親和色譜從培養(yǎng)物上清液中純化特異性VHH。

所有編碼特定VHH的cDNA都保存在我們的實(shí)驗(yàn)室中。

Covalab專注于抗體研發(fā)領(lǐng)域，涵蓋抗體和試劑盒。擁有多種針對流行和罕見靶標(biāo)的一抗，涉及多種應(yīng)用領(lǐng)域，如癌癥，表觀遺傳學(xué)，細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，心血管等疾病的生物標(biāo)志物，神經(jīng)系統(tǒng)，離子通道，微生物學(xué)，病毒學(xué)等。還有特色的應(yīng)用于模式動(dòng)物斑馬魚的抗體。此外還有各種ELISA試劑盒，ELISPot試劑盒，FluoroSpot試劑盒等。艾美捷科技是Covalab的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。