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二抗是指用于靶向結合一抗的抗體。在多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實驗中,二抗經常和一抗結合使用以檢測目標蛋白。很多二抗都帶有標記物,例如Alexa Fluor熒光染料或辣根過氧化物酶(HRP),從而使二抗的信號可以被檢測到。
實驗中也可以使用帶有標記物的一抗,但是二抗有很多優點。無論是使用哪種一抗進行檢測,使用二抗可便于更換不同的標記物。例如,同樣的一抗可以與HRP標記二抗一起用于免疫印跡,也可以與另一種Alexa Fluor 488熒光標記二抗一起用于免疫熒光實驗。
另外,二抗結合在抗原位置的標記染料比直標一抗要多,從而增強檢測信號。使用二抗可以避免對一抗進行復雜且昂貴的化學標記(偶聯),而且偶聯反應(具有氨基酸特異性)可能干擾一抗對抗原的識別。
要選擇出一種適用于您的應用和研究的最佳二抗,建議考慮以下因素:
種屬來源和種屬反應性
特異性反應
純化方法
交叉吸附
多重檢測能力
抗體類型和亞型
完整抗體還是抗體片段
標記物
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