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上海古朵生物科技有限公司

多重免疫熒光染色實驗 常見問題解答

時間:2022-4-20閱讀:221
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問:樣本可以做成冰凍切片嗎?

 可以的。抗原修復步驟不推薦用加熱的方法,推薦用抗體洗脫液

 所有操作要避光嗎?

 不需要,在常規環境下操作就可以,染料的熒光強度很高。

 抗體修復液每一輪修復都要更換嗎?

 是的,每一輪都要根據抗體選擇相應的修復液。

 染料的選擇會影響后染色嗎,有共定位的話怎么辦?

 共定位的情況,我們可以通過單一通道觀察來更好的檢測各指標的分布情況,染料不會對染色有影響,串色的情況需要預實驗做充足,包括抗體稀釋比例,染料與放大液比例,修復條件的確定。

 多色用的一二抗各是什么種屬?

 多色的優勢在于一二抗種屬無需特別要求,一抗根據樣本種屬選擇既可,二抗根據一抗選擇即可,多個抗體組合,種屬不會有影響。

 抗體洗脫和微波修復哪種方式洗脫效果更好?

 微波修復洗脫更穩定,抗體洗脫液對大多數抗體都管用,難洗的抗體延長洗脫時間就可以啦!

 實驗用時真的一天能做完嗎?

 相比普通的組織熒光實驗,我們一抗的孵育時間只需室溫30min,二抗和信號放大步驟只需孵育10min,能大大節約時間,五色左右可在一天內做完。

 多色樣本的寄送有條件限制嗎?

 正常的石蠟切片和組織芯片很穩定,只要防震盒常溫運輸即可,冰凍切片的話,需要干冰低溫運輸。

 我的組織還有GFP蛋白,給結果的時候能排除干擾嗎?

 可以的,結果分析的時候可以避免綠色通道,分析軟件賦予的顏色是偽彩色,可以更換其他顏色。

 我這邊提供抗體的話,抗體需要滿足什么條件嗎?

 抗體最起碼要滿足IHC/IF的實驗應用,各品牌供應商都會提供相應的實驗驗證的,我司組化抗體經過嚴格實驗驗證,是不錯的選擇。

 如果我能提供抗體給你們做服務的話,需要的抗體量是多少?

 需要的抗體量要根據樣本數來,但一般來講,50-100ul的抗體足夠完成預實驗+正式實驗了。 在指標與染料的搭配以及染色順序上,有什么規律嗎?

 并沒有一個特別的線性關系,和蛋白的種類、表達量以及修復條件都有關系,所以會多因素考慮,多嘗試,預實驗很重要。

 TSA技術原理中有抗體洗脫的步驟,但是在你們的試劑盒步驟說明中卻沒有?

 試劑盒步驟中的抗原修復過程就是抗體洗脫過程。

 B細胞、T細胞、DC細胞常用maker能推薦下嗎?

 

T細胞:CD3CD4CD8FoxP3(再細化還有:GranzymeBPD-1TIM-3CD45
B細胞:CD19
DC細胞:CD8αCD11b

 


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