考馬斯亮藍法測蛋白含量的正確使用方法

　　樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。

　　在酸性溶液中，考馬斯亮藍G-250與蛋白質結合形成藍色復合物;該復合物在595nm處有最大吸收峰， 其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質分析。

　　使用所需設備：

　　考馬斯亮藍法測蛋白 產品組成：

　　試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

　　標準品：液體×1瓶，4℃保存。

　　樣品中可溶性蛋白質提取：

　　液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。

　　組織樣品：準確稱取約0.1 g樣品，加1mL提取液(自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)，冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。(動物樣品常常需要稀釋)

　　吸光值測定：

　　1. 分光光度計預熱30 min以上，蒸餾水調零。

　　2. 空白管：取0.5mL EP管，加入40μL蒸餾水，250μL試劑一，混勻后室溫靜置10min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于595nm比色，10~20min完成比色，記為A空白管。

　　3. 標準管：取0.5mL EP管，加入40μL標準液，250μL試劑一，混勻后室溫靜置10min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于595nm比色，10~20min完成比色，記為A標準管。

　　4. 測定管：取0.5mL EP管，加入40μL待測液，250μL試劑一，混勻后室溫靜置10min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，于595nm比色，10~20min完成比色，記為A測定管。

　　蛋白質含量計算公式：

　　C待測(µg/m L)= C標準管×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)

　　=50×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)

　　C標準管：標準品蛋白質濃度，50μg/mL。

　　注意事項：

　　1.加考馬斯亮藍后，在10~20min內吸光值相對較穩定，因此須在10~20min完成比色。

　　2.不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測完成后立即用95%乙醇沖洗。

　　3.測定前用1~2個樣做預實驗，確保蛋白濃度在0~100µg/ml范圍內，否則需要做相應稀釋。

　　考馬斯亮藍法測蛋白 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。