古朵生物：ELSIA檢測試劑盒的即陽性判定值法和抑制率法

　　目視法簡捷明了，但頗具主觀性。在條件許可下，應該用比色計測定吸光值，這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標本(sample，S)、陽性對照(P)、和陰性對照(N)的吸光值，然后進行計算。計算方法有多種，大致可分為陽性判定值法和標本與陰性對照比值法兩類。

　　(1) 間接法和夾心法

　　這類反應的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標本也無色或近于無色者判為陰性，顯色清晰者為陽性。但在ELSIA檢測試劑盒中，正常人血清反應后常可出現(xiàn)呈色 的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異，因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在 用肉眼判斷結(jié)果時，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的指標。

　　a. 陽性判定值

　　陽性判定值(cut-off value)一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標準。

　　用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定，試劑的制備必須標準化，陽性和陰性的對照品應符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴格按規(guī)定操作。陽性判定值公式 中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標本的實驗檢測而得到的。現(xiàn)舉某種檢測HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復鈣人血 漿，陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng/ml.每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX) 和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX)，兩個平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個特定的數(shù)值(例0.400)，試驗才有效。3個陰性對照A值均應 ≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX;如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實 驗無效。陽性判定值按下式計算： 陽性判定值=NCX+0.05 標本A值>陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。應注意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件 下，而不是對各種試劑均可通用。

　　根據(jù)以上敘述可以看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控作用，試劑變質(zhì)和操作不當均會產(chǎn)生"試驗無效"的后果。

　　b.標本/陰性對照比值

　　在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標本(S)和陰性對照(N)的A值后，計算S/N值。也有寫作P/N的，這里的 P不代表陽性(positive)，而是病人(patient)的縮寫，不應誤解。為避免混淆，ELSIA檢測試劑盒更 宜用S/N表示。在早期的間接法ELSIA檢測試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性標準，現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應該用實驗求出各自的 S/N的閾值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應后產(chǎn) 生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此，這類試劑盒規(guī)，如N<0.05(或其他數(shù)值)，則按0.05計算，否則將出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

　　(2)競爭法

　　在競爭法ELSIA檢測試劑盒中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應zui為敏感。

　　競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種。

　　a. 陽性判定值法

　　與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，但在計算公式中引入陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。ELSIA檢測試劑盒中 的陰性對照為不含抗HBc的復鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml.每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先計算陰 性對照A值的平均值(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX)，兩個平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個特定的數(shù)值(例如0.300)，試驗才有效。3個 陰性對照A值均應小于2.000，而且應≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個陰性對照重新計算×NCX;如有 2個陰性對照A超出以上范圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算：

　　陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX

　　標本A值≤陽性判定值的反應為陽性，A>陽性判定值的反應為陰性。

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