古朵：關(guān)于WB實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題以及解決方案

　　主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷(xiāo)售。并代理銷(xiāo)售Omega、Sigma、R&D、ATCC、HYCLONE等二十多家國(guó)外，致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)，滿(mǎn)足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。

　　1、westernblot的優(yōu)點(diǎn)

　　答：靈敏，可達(dá)ng級(jí)，用Ecl顯色法理論上可達(dá)pg級(jí)。方便，特異性高。

　　2、為什么我的細(xì)胞提取液中沒(méi)有目標(biāo)蛋白?

　　答：原因有很多:a)你的細(xì)胞中不表達(dá)這種蛋白質(zhì)，換一種細(xì)胞;b)你的細(xì)胞中的蛋白質(zhì)被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性;c)你的抗體不能識(shí)別目標(biāo)蛋白，多看看說(shuō)明，看是否有問(wèn)題。

　　3、我的細(xì)胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，為什么呢?

　　答：a)有沉淀可能因?yàn)槟愕牡鞍讻](méi)有變性*，可以適當(dāng)提高SDS濃度，同時(shí)將樣品煮沸時(shí)間延長(zhǎng)，b)也不排除你的抗原濃度過(guò)高，這時(shí)再加入適量上樣緩沖液即可。

　　4、我做的蛋白質(zhì)分子量很小(10KD)，請(qǐng)問(wèn)怎么做WB?

　　答：可以選擇0.2μml的膜，同時(shí)縮短轉(zhuǎn)移時(shí)間。也可以將兩張膜疊在一起，再轉(zhuǎn)移。其他按步驟即可。

　　5、我的目的帶很弱，怎么加強(qiáng)?

　　答：可以加大抗原上樣量。這是zui主要的。同時(shí)也可以將一抗稀釋比例降低。

　　6、膠片背景很臟，有什么解決方法?

　　答：減少抗原上樣量，降低一抗?jié)舛龋淖円豢狗跤龝r(shí)間，提高牛奶濃度。

　　7、目標(biāo)帶是空白，周?chē)斜尘埃菫槭裁?

　　答：你的一抗?jié)舛容^高，二抗上HRP催化活力太強(qiáng)，同時(shí)你的顯色底物處于一個(gè)臨界點(diǎn)，反應(yīng)時(shí)間不長(zhǎng)，將周?chē)孜锎呋辏纬闪丝瞻准础胺戳连F(xiàn)象"。將一抗和二抗?jié)舛冉档停蚋鼡Q新底物。

　　8、我的膠片是一片空白，是怎么回事?

　　答：如果能夠排除下面的幾個(gè)問(wèn)題那么問(wèn)題多半出現(xiàn)在一抗和抗原制備上。

　　a)二抗的HRP活性太強(qiáng)，將底物消耗光;b)ECM底物中H2O2，不穩(wěn)定，失活;c)ECL底物沒(méi)覆蓋到相應(yīng)位置;d)二抗失活。

　　9、我在顯影液中顯影1分鐘和5分鐘后,底片漆黑一片,是什么原因呢?

　　答：a)可能是紅燈造成的,膠片本來(lái)就被曝光了，可以在*黑暗的情況下操作.看是否有改善.;b)顯影時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。

　　10、DAB好還是ECM好?

　　答：DAB有毒，但是比較靈敏，是HRPzui敏感的底物;ECM結(jié)果容易控制，但被催化時(shí)靈敏度差一點(diǎn)，但如果達(dá)到閥值，就特別靈敏，可以檢測(cè)pg級(jí)抗原。要看你實(shí)驗(yàn)的情況

　　elisa試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專(zhuān)門(mén)從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷(xiāo)售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷(xiāo)多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿(mǎn)足客戶(hù)的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶(hù)需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶(hù)滿(mǎn)意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針