古朵詳解：elisa的類型及實(shí)驗(yàn)原理

　　ELISA法類型：

　　夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體，重復(fù)兩次，洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果。

　　間接法常用于檢測(cè)抗體，將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原，重復(fù)兩次。洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器測(cè)定塑膠盤中的吸光值，以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。

　　競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體;加入待測(cè)檢體、帶有酶的抗原，與塑膠孔盤上的抗體專一性鍵結(jié)。塑膠孔盤上固著抗體數(shù)量有限，檢體中抗原量越多，帶有酶的抗原可鍵結(jié)固著抗體就越少。

　　夾心法

　　夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般之操作步驟為:

　　將具有專一性之抗體固著(coating)于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

　　加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)之抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)

　　洗去多余待測(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專一之一次抗體，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

　　洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)

　　洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

　　間接法

　　間接法常用于檢測(cè)抗體，一般之操作步驟為：

　　將已知之抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余之抗原。

　　加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)之一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。

　　洗去多余待測(cè)檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測(cè)之一次抗體鍵結(jié)。

　　洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，藉儀器(ELISA reader)測(cè)定塑膠盤中的吸光值(OD值)，以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。

　　競(jìng)爭(zhēng)法

　　競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，其操作步驟為：

　　將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

　　加入待測(cè)檢體，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)

　　加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來。

　　洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

　　當(dāng)需要偵測(cè)無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

　　elisa實(shí)驗(yàn)原理：

　　在測(cè)定時(shí)把受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗原或抗體，按不同步驟與固相載體表面抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌方法使固相載體上的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。

　　加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無定性或定量分析。

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