古朵經(jīng)驗(yàn)總結(jié)：確定ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的吸光值的方法
 

　　每個(gè)ELISA試驗(yàn)都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，所以經(jīng)常有客戶(hù)咨詢(xún)對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的吸光值具體有什么要求，多大范圍比較合?有些人是標(biāo)曲中吸光值范圍在0-1.1072，經(jīng)驗(yàn)豐富的科研者都建議不要超過(guò)1，濃度太大了要稀釋。那么該如何稀釋?zhuān)♂屃瞬痪筒皇菢?biāo)曲上的那個(gè)濃度值了嗎?

　　一、依據(jù)郎伯比爾定律，在0.2~0.8吸光度值與濃度具有線(xiàn)性關(guān)系，盡量在這個(gè)范圍內(nèi)。

　　二、在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作中，選擇不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定其吸光值。直到他們的相關(guān)度不是很好之前都是可以的。相關(guān)度是0.999以上。所以一般情況下，吸光值在1左右能能夠達(dá)到相關(guān)度較好的水平!

　　三、得看你的待測(cè)的樣品的不同濃度的吸光光度值，大致的落在什么范圍(用的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方法是不適合待測(cè)樣品，有沒(méi)有沉底或者其他的不正常的現(xiàn)象)，樣品的濃度需要提前摸索摸索，范圍拉大(如：6.25、12.5、25、50、100、200、400、600、800、1000、2000等)確定好實(shí)驗(yàn)所需要的濃度范圍，就是坐標(biāo)曲線(xiàn)了。的建議就是：做3組平行樣(也包括樣品)，這樣線(xiàn)性關(guān)系會(huì)更好。

　　四、稀釋相對(duì)而言比較容易。如配1000μg/ml的樣品，可以通過(guò)其稀釋成800、600、400.具體的如取1000的濃度4ml加入溶劑(水等)1ml可以得到800μg/ml依次類(lèi)推。

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