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在建立ELISA試劑盒方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1～2小時，產物的天生可達。濕盒應先放在保溫箱中預溫至劃定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應如斯。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當。這就是為什么ELISA試劑盒反應老是需要一定時間的溫育。
溫育常采用的溫度。室溫溫育時要平置于操縱臺上即可。這是一個逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。
保溫的方式除有的儀器附有特制的電熱塊外，一般均采用水浴，可將ELISA試劑盒板置于水浴箱中，ELISA試劑盒板底應貼著水面，使溫度迅速平衡。為避免蒸發，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜籠蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上。ELISA試劑盒若用保溫箱，應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui后將板放在濕紗布上。應留意溫育的溫度和時間應按劃定力求正確。抗原抗體反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜，以形成zui多的沉淀。
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