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ChIP:基因組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)的連接

時(shí)間:2012-11-5閱讀:814
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              ChIP還可與DNA芯片和測(cè)序技術(shù)相結(jié)合,用于高通量的篩選已知蛋白因子的未知DNA靶點(diǎn)和研究反式作用因子在整個(gè)基因組上的分布情況,這將有助于深入理解DNA-蛋白質(zhì)相互作用的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),了解一些疾病如癌癥、心血管疾病和中央神經(jīng)紊亂的發(fā)生的機(jī)制。

 
         基因組學(xué)和蛋白組學(xué)都將把染色質(zhì)作為研究對(duì)象,但兩個(gè)領(lǐng)域采用的方法各異。在基因組學(xué)研究中,研究人員通常從一個(gè)蛋白質(zhì)開(kāi)始研究,采用ChIP去找出與基因組關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)。而蛋白組學(xué)研究采用的是反向方法,先用一個(gè)特殊的DNA序列作為尋找蛋白質(zhì)的誘餌;然后用ChIP去證實(shí):那些蛋白質(zhì)就是在體內(nèi)與DNA序列相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)。 
   

              ChIP的原理很簡(jiǎn)單,就是選擇性地富集包含某一特定抗原的染色質(zhì)片段。傳統(tǒng)的ChIP包含以下幾個(gè)步驟:甲醛處理使蛋白質(zhì)與DNA交聯(lián);超聲波將染色質(zhì)打斷成一定大小;通過(guò)抗體沉淀蛋白質(zhì)-DNA交聯(lián)復(fù)合體;用蛋白酶K處理,解除交聯(lián),純化DNA;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)DNA的量。雖然ChIP技術(shù)的原理不復(fù)雜,但是對(duì)技術(shù)的要求高,實(shí)驗(yàn)步驟的設(shè)計(jì)摸索耗時(shí)耗力,實(shí)驗(yàn)耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)。

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