大鼠類風濕因子（RF）定量檢測試劑盒（ELISA）
使用說明書
僅供科研使用，不得用于醫學診斷。
使用前仔細閱讀本說明書。
用途： 用于定量檢測大鼠血清、血漿及相關液體樣本中類風濕因子（RF）的
含量。
工作原理
本試劑盒采用雙位點夾心酶聯免疫吸附法（ELISA），測定樣品中大鼠類風濕因
子（RF）的水平。向預先包被大鼠類風濕因子（RF）抗體的酶標孔中加入標準品、
待測樣本和HRP 標記的類風濕因子（RF）抗體，經過溫育和洗滌，去除未結合的
組分，然后再加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色
的深淺與樣品中大鼠類風濕因子（RF）的濃度呈正相關。
試劑盒組成
1 標準品（100ng/ml） 0.5ml 7 顯色劑A 液6ml
2 標準品稀釋液6mL 8 顯色劑B 液6ml
3 酶標包被板12 孔×8 條9 終止液6ml
4 酶標試劑6ml 10 說明書1 份
5 20×濃縮洗滌液25ml 11 封板膜2 張
6 樣品稀釋液6ml 12 密封袋1 個
注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：100、50、25、12.5、6.25、0 ng/ml
需要而未提供的試劑和器材
1． 37℃恒溫箱。
2． 標準規格酶標儀。
3． 精密移液器及一次性吸頭
4． 蒸餾水，
5． 一次性試管
6． 吸水紙
注意事項
1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30 分鐘。酶標包被
板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差
3． 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
4． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
5． 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
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6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
7． 底物B 對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用
力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml 注入孔內，浸泡1-2 分鐘。根據需要，重
復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標本要求www.hfswsj.com

1．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。
若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
操作程序
1． 分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品
孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl；在酶標包被板
上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋
度為5 倍）。每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育
60 分鐘。
2． 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30 秒，甩去洗滌液，用吸水紙
拍干。如此重復5 次，拍干。
3． 每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
4． 取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
5． 測定：以空白孔調零，在450nm 波長下測量各孔的吸光度值（OD 值）。測定
應在加終止液后15 分鐘以內進行。
6． 根據標準品的濃度及對應的OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣
品的OD 值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來
計算。應記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。
操作程序總結：
準備試劑，樣品和標準品
加入準備好的樣品、標準品和酶標試劑，37℃反應60分鐘
洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
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