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人關節(jié)軟骨細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)方法

時間:2021/6/17閱讀:520
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人關節(jié)軟骨細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

MCF7/Adr人乳腺癌阿霉素耐藥株
BEL/Adr人肝癌阿霉素耐藥株
SGC7901/Adr人胃癌阿霉素耐藥株
BIU-87/Adr人膀胱癌阿霉素耐藥株
A549/Adr人肺癌阿霉素耐藥株
HL-60/Taxol人白血病紫杉醇耐藥株
K562/Taxol人白血病紫杉醇耐藥株
A2780/Taxol 人卵巢癌紫杉醇耐藥株
HO-8910/Taxol人卵巢癌紫杉醇耐藥株
HCT8/Taxol人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株
A549/Taxol 人肺癌紫杉醇耐藥株
hct116/L人結(jié)腸癌耐奧沙利鉑細胞株
lovo/L人結(jié)腸癌耐奧沙利鉑細胞株
HCT8/L人結(jié)腸癌耐奧沙利鉑細胞株
BEL/L人肝癌耐奧沙利鉑細胞株
SMMC7721/L人肝癌奧沙利鉑耐藥株
A549/L人肺癌耐奧沙利鉑細胞株
HCT8/FU人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株
ovo/FU人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株
SMMC7721/FU人肝癌氟尿嘧啶耐藥株
PATU-8988/FU人胰腺癌氟尿嘧啶耐藥株
SGC7901/FU人胃癌氟尿嘧啶耐藥株
A549/FU人肺癌氟尿嘧啶耐藥株
K562/DDP人白血病順鉑耐藥株
MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株

 

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