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α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)?樣本的前處理

時(shí)間:2021/8/26閱讀:416
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α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線(xiàn)粒體蛋白的分離:

①稱(chēng)取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL?試劑三,用冰浴勻漿 器或研缽勻漿。

②將勻漿600g,4℃離心5min。

③棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。

④上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線(xiàn)粒體泄漏的α-KGDH(此步可選做)。

⑤在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL?試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W, 超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線(xiàn)粒體α-KGDH活性測(cè)定。

測(cè)定原理:α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+?和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、二氧化碳和?NADH,NADH在340?nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

磷酸化動(dòng)力相關(guān)蛋白1抗體

DNA連接酶4抗體

二肽基肽酶6抗體

二氫葉酸還原酶抗體

有絲分裂控制樣蛋白DIS3L抗體

有絲分裂控制蛋白樣DIS3L2抗體

DOM3Z蛋白抗體

蓬亂蛋白2抗體

磷酸化蓬亂蛋白2抗體

轉(zhuǎn)錄下調(diào)蛋白1抗體

脫氫酶/還原酶家族成員2抗體

牙本質(zhì)磷蛋白抗體

Dermokine β蛋白抗體

DPCR1蛋白抗體

表皮乳頭源性蛋白6抗體

雙特異性蛋白磷酸酶7抗體

雙特異性蛋白磷酸酶26抗體

阿米洛利結(jié)合蛋白1抗體

S期激酶活化蛋白DBF4A抗體

著絲粒相關(guān)蛋白DSN1抗體

雙皮層蛋白結(jié)構(gòu)域蛋白DCDC2抗體

神經(jīng)干細(xì)胞樹(shù)突調(diào)節(jié)蛋白DAGLα抗體

對(duì)接蛋白4抗體

DULLARD蛋白抗體

絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MNB抗體

無(wú)胸腺癥相關(guān)蛋白DGCR6/迪格奧爾格綜合征關(guān)鍵基因6抗體

朊蛋白DPL抗體

肌強(qiáng)直性營(yíng)養(yǎng)不良蛋白激酶抗體

有絲分裂控制蛋白dis3抗體


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