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設計引物應仔細考慮原則

時間：2023/10/8閱讀：157
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引物的特異性影響 PCR 成功的概率，良好的引物設計對 PCR 擴增的成功至關重要。當您開始設計引物時，應仔細考慮以下幾個原則：

1、引物的長度。PCR引物一般在18-22bp左右。這對于引物特異性和在退火溫度下的結合來說是足夠長的。

2、熔化溫度(Tm)。Tm 定義為在此溫度下，DNA 雙鏈體的一半將解離成單鏈 DNA。52-58C 范圍內的引物 Tm 是最佳的。

3、GC 含量。最佳 GC 含量應為 40-60%。

4、許多軟件可用于引物設計，例如primer5和Oligo。這些軟件推薦的引物通常可以滿足我們的需求。


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