PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因（長度為100～300bp時）可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸（此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性）。PCR反應條件的控制如下：
1. PCR反應的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子。
2. 鎂離子濃度總量應比dNTPs的濃度高，常用1.5 mmol/L。

3. 底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200 umol/L。

4. TaqDNA聚合酶2.5U(100 ul）。　

5. 引物濃度一般為0.1 ～0.5 umol/L。　

6. 反應溫度

（1）變性溫度和時間95℃，30 s。

（2）退火溫度和時間低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。

（3）延伸溫度和時間72℃，1 min/kb(10 kb內）。

（4）Tm值=4(G+C) +2(A+T)。

7. 循環次數

一般為25 ～30次。循環數決定PCR擴增的產量。模板初始濃度低，可增加循環數以便達到有效的擴增量。但循環數并不是可以無限增加的。一般循環數為30個左右，循環數超過30個以后，DNA聚合酶活性逐漸達到飽和，產物的量不再隨循環數的增加而增加，出現了所謂的“平臺期"。

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PCR檢測試劑盒試驗反應條件的控制

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