免疫組化(IHC)試驗過程問題分析

時間：2023/12/4閱讀：197

免疫組化(IHC)，免疫組織化學技術(immunohistochemistry)，是一項利用抗原抗體反應，通過使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內抗原，對蛋白定位，定性的實驗技術。

免疫組化(IHC)試驗過程問題分析：

1、染色過強

a、抗體濃度過高或孵育時間過長降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過夜

b、孵育溫度過高超過37度一般在室溫20-28度

c、DAB顯色時間過長或濃度過高顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準

2、非特異性背景染色

a、操作過程中沖洗不充分每步沖洗3次每次5分鐘

b、組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長

c、組織中含內原性生物su 正常非免疫動物血清再封閉

d、血清蛋白封閉不充分延長血清蛋白封閉時間

3、染色弱

a、抗體濃度過低、孵育時間過短提高抗體濃度、孵育時間不能少于60分鐘

b、試劑超過有效使用時間應更換試劑

c、操作中添加試劑時緩沖液未瀝干每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液使試劑稀釋（應防止切片干燥）

d、室溫太低低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過夜

e、蛋白封閉過度封閉不要超過12分鐘

4、染色陰性

a、操作步驟錯誤應重試設陽性對照

b、組織中無抗原設陽性對照以驗證試驗結果

c、一抗與二抗種屬連接錯誤仔細確定一抗二抗種屬無誤

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