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大鼠端粒酶ELISA試劑盒具體操作步驟

時間:2024/10/28閱讀:60
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大鼠端粒酶ELISA試劑盒具體操作步驟:

1.     根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

2.     加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品,生物su標記的抗-IgG抗體,鏈霉親和素-HRP,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl,在樣本反應孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品最終稀釋度為5倍),蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。

3.     配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

4.     洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復4次,拍干。

5.     加生物su標記的抗-IgG抗體:每孔加入生物su標記的抗-IgG抗體50μl(空白孔除外)。37℃溫育30分鐘

6.     洗滌:操作同4。

7.     加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP(空白孔除外),輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

8.     洗滌:操作同4。

9.     顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.  終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.  測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

12.  計算

13.    以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。


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