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    Elisa試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中，在今天的文章中，將為大家介紹如何用ELISA方法去檢測(cè)ABA的含量！

    先將ABA蛋白質(zhì)復(fù)合物與固相載體(聚苯乙烯微量滴定板)結(jié)合,然后將待測(cè)的ABA(樣品或標(biāo)準(zhǔn)品)和兔抗ABA抗體加入微量滴定板的孔中,進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng),接著棄去上清液,洗滌固相表面,加入酶標(biāo)二抗使其與結(jié)合在固相ABA上的抗體反應(yīng),zui后去除多余的未反應(yīng)的酶標(biāo)二抗,測(cè)定與固相結(jié)合的酶活性,酶活性和待測(cè)ABA含量呈負(fù)函數(shù)關(guān)系,即固相ABA結(jié)合的抗體與酶標(biāo)二抗量(OD或B%)隨待測(cè)ABA含量增加而減少,以一系列已知濃度的ABA的OD值制圖而獲得標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)性抑制曲線,對(duì)于未知樣品B,只要在同樣條件下測(cè)定反應(yīng)后的OD值,就可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到ABA的量。

測(cè)定方法 
1.包被：在微量滴定板內(nèi)準(zhǔn)確加入100μLABA包被液，37℃濕盒過夜。 
2.標(biāo)樣稀釋?：取8支試管每管加150μLDB，*管中加入50μL（2000ng/50μL）標(biāo)準(zhǔn)液，充分渦旋后，取50μL至第二號(hào)管中，同樣渦旋后，取50μL到第三管；依次稀釋到第六管，稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)ABA依次為1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。 
3. 洗板：從37℃濕盒中取出滴定板，恢復(fù)到室溫后，棄去包被液，用WB（洗滌緩沖液）洗滌三次，甩干（吸水紙）。 
4.加樣：1～8孔對(duì)應(yīng)加入ABA標(biāo)樣50μL，10號(hào)孔相應(yīng)加入zui濃ABA標(biāo)樣，9號(hào)孔加50μLDB，三排重復(fù)；然后每孔加50μL抗體，37℃ 45分鐘。 
5.洗板： 
6.加酶標(biāo)二抗：每孔加100μL，37℃反應(yīng)1小時(shí)。 
7.洗板： 
8.顯色：各孔加10μLOPD顯色液，37℃ 20分鐘。 
9.終止反應(yīng)：各孔加50μL 6NH2SO4。 
10.讀數(shù)：490nm讀取OD值。其中10號(hào)孔調(diào)零,而9號(hào)孔為zui大值(B0),1~8號(hào)孔的OD值為B。 
11.結(jié)果計(jì)算：以In（B/B0）∕（1－B/B0）為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)ABA濃度的常用對(duì)數(shù)（lg［ABA］）為橫坐標(biāo),繪制曲線。