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免疫組化(Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC)原理
閱讀:7473 發布時間:2012-12-26免疫組化是應用免疫學基本原理--抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學技術(Immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(Immunocytochemistry)。
*,抗體與抗原之間的結合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,即先將組織或細胞中的某些化學物質提取出來,以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物,制備特異性抗體,再用這種抗體(*抗體)作為抗原去免疫動物制備第二抗體,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結合,將抗原放大,由于抗體與抗原結合后形成的免疫復合物是無色的,因此,還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應部位顯示出來(常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒)。通過抗原抗體反應及呈色反應,顯示細胞或組織中的化學成分,在顯微鏡下可清晰看見細胞內發生的抗原抗體反應產物,從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質,如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。
免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。
用于病理診斷的主要有免疫熒光法和免疫酶法。免疫熒光法是現代生物學和醫學中廣泛應用的方法之一,包括熒光抗體和熒光抗原技術,具有抗原抗體反應的特異性,染色技術的快速性,在細胞或組織上定位的準確性,以及熒光效應的靈敏性等優勢。但是,由于免疫熒光法必須具有熒光顯微鏡,熒光強度隨時間的延長而逐漸消退,結果不易長期保存等缺點,在普及應用上受到一定限制,而逐漸被免疫酶法所取代。
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