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電針對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝組織白介素－１８的影響

王 力 龔 標(biāo) 朱麗麗 卓廉士 李學(xué)智 張沁舒 伍 芳

（重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，重慶 ４０００１６）

【摘 要】 目的：探討電針對(duì)非酒精性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ）大鼠白介素－１８（ＩＬ－１８）的影響及治療 ＮＡＦＬＤ 的機(jī)制。方法：將４４只ＳＤ大鼠隨機(jī)分為造模組３３只，空白組１１只。造模大鼠喂養(yǎng)高糖高脂飼料５周制備ＮＡＦＬＤ模型，造模成功后，隨機(jī)分為模型組、電針組和非穴組。電針組針刺“足三里”“豐隆”“三陰交”“太沖”穴（連續(xù)波，頻率２Ｈｚ，強(qiáng)度１．５Ｖ），非穴組針刺大鼠尾巴中１／３段隨機(jī)４處，每日治療１次，連續(xù)４周。采用全自動(dòng)化學(xué)分析儀檢測(cè)大鼠空腹血糖（ＦＢＳ），放射免疫法檢測(cè)空腹胰島素（ＦＩＮＳ），計(jì)算空腹胰島素抵抗指數(shù)（ＦＩＲＩ），采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清及肝組織勻漿ＩＬ－１８含量變化，ＨＥ 染色觀察肝組織病理學(xué)改變。結(jié)果：針刺４周后，模型組 ＦＢＳ、ＦＩＮＳ、ＦＩＲＩ、肝組織和血清ＩＬ－１８與空白組比較都顯著升高（Ｐ＜０．０１），模型組肝組織出現(xiàn)不同程度的脂肪變性；電針組 ＦＢＳ、FＩＮＳ、ＦＩＲＩ、肝組織勻漿ＩＬ－１８和血清ＩＬ－１８與模型組比較都顯著下降（Ｐ＜０．０５），電針組肝組織內(nèi)脂肪性變減輕；非穴組 ＦＢＳ、ＦＩＮＳ、ＦＩＲＩ、肝組織勻漿ＩＬ－１８和血清ＩＬ－１８與模型組比較變化都不明顯（Ｐ＞０．０５），非穴組肝組織內(nèi)脂肪性變無明顯改善。結(jié)論：電針可能通過降低肝組織及血清ＩＬ－１８，阻斷多糖攻擊肝臟所致的損傷作用，改善肝臟功能，而實(shí)現(xiàn)對(duì)ＮＡＦＬＤ大鼠的治療作用。

【關(guān)鍵詞】 非酒精性脂肪肝 電針干預(yù) 白介素－１８ 胰島素抵抗

在非酒精性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ）的發(fā)病過程中，脂肪組織分泌的脂肪因子隨血液直接進(jìn)入肝臟，調(diào)節(jié)胰島素的敏感性，改善糖、脂代謝等。近年臨床報(bào)道顯示［１－２］，針刺治療 ＮＡＦＬＤ確有明顯療效，且具有安全性高、副作用小等優(yōu)勢(shì)。實(shí)驗(yàn)研究表明，電針治療 ＮＡＦＬＤ 主 要 是 通 過 改 善 胰 島 素 抵 抗 （ＩＲ）狀態(tài)［３］，降低血脂，減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，來改 善 肝 組織的脂肪變性和 炎 性 損 傷［４－６］。白 介 素（ＩＬ）－１８是一種與ＩＲ 密 切 相 關(guān) 的 重 要 細(xì) 胞 因 子［７］，研 究 其 與ＩＲ的相關(guān)性，深 入 闡 明 ＮＡＦＬＤ 發(fā) 病 機(jī) 制，可 更 進(jìn)一步了解 針 刺 治 療 ＮＡＦＬＤ 的 作 用 機(jī) 制。有 鑒 于此，本研究建立 ＮＡＦＬＤ 大鼠模型，觀察針刺對(duì)ＩＬ－１８的影響，探討針刺治療 ＮＡＦＬＤ的作用機(jī)制。

１ 材料與方法

１．１ 動(dòng)物與分組雄性ＳＤ大鼠４４只，體 質(zhì) 量（１７０±２０）ｇ，清 潔級(jí)，購自重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)ＳＣＸＫ（渝）２００７－０００１］，此研究獲得重慶醫(yī) 科大學(xué)醫(yī)學(xué)研究倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。分籠飼養(yǎng)３ｄ，隨機(jī)分為空白組１１只和造模組３３只，５周末，隨機(jī)抽取空白組大鼠１只和造模組大鼠３只，采用水合氯醛過量麻醉處死，測(cè)量相關(guān)指標(biāo)，然后將３０只造模大鼠隨機(jī)分為模型組、電針組和非穴組各１０只。

１．２ 主要試劑及儀器

豬油和蛋黃粉為市售；膽固醇購于重慶醫(yī)科大學(xué)設(shè)備科；丙基硫氧嘧啶（湖南迪諾制藥有限公司，批號(hào)１００３０６）購 自 藥 店；胰島素放射免疫試劑盒購自北方生物 技 術(shù) 研 究 所；ＩＬ－１８酶聯(lián)免疫分析試 劑盒購自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。１００℃水浴箱（常州國華電器 有 限 公 司）、８０－２型 低 速 離 心 機(jī)（上海手術(shù)器械廠）、賽多利斯 ＢＳ１１０Ｓ電子秤（德國賽多利斯公司）、ＵＮＩＣＯ７２００分光光度計(jì)［龍尼柯（上海）儀器有限公司］、生物顯微鏡（日立公司）、圖像采集系統(tǒng)（北京３０１醫(yī)院）等設(shè)備由重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院提供，電針綜合治 療 儀（華 佗 牌 ＳＤＺ－Ⅱ型）、毫針（０．２８ｍｍ×２５ｍｍ，華 佗 牌）由重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院針灸實(shí)驗(yàn)室提供。

１．３ 造模方法

造模組大鼠采用楊坤造模法［８］，即 喂 養(yǎng)２％膽固醇、０．２％丙基硫氧嘧啶、１０％豬油、１０％蔗糖、５％蛋黃粉、７２．８％普通飼料混合而成的高糖高脂飼料５周。５周末，隨機(jī)麻醉過量處死空白組大鼠１只和造模組大鼠３只，病理切片表明，造模組大鼠較同期空白組大鼠肝細(xì)胞體積明顯增大，肝組織出現(xiàn)不同程度的脂肪變性，且以大泡性為主，證明 ＮＡＦＬＤ已經(jīng)形成。

１．４ 針刺方法

根據(jù)疏肝健脾、祛痰化濕、活血化瘀治 則，電 針組取大鼠“足三里”“豐隆”“三陰交”“太沖”穴，非穴組在尾部中１／３段取任意４點(diǎn)作為對(duì)照，大鼠腧穴按《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》定位［９］。針刺方法：將大鼠置于大鼠固定器（重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心提供）中，取一側(cè)上述諸穴，分別刺入０．５１ｃｍ 深，然 后 接通電針綜 合 治 療 儀，將“足 三 里”與“三 陰 交”相 接，“豐隆”和“太沖”相接，非穴組４部位兩兩相接，選擇連續(xù)波，電針頻率２Ｈｚ，強(qiáng)度１．５Ｖ，以下肢輕微抖動(dòng)為 宜，保 持 大 鼠 處 于 清 醒 狀 態(tài)。每 日１次，每 次１５ｍｉｎ左右，連續(xù)治療４周，左右側(cè)穴隔日輪換。治療期間，空白組大鼠亦分別置入固定器中１５ｍｉｎ，無其它處理。

１．５ 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

空腹血糖（ＦＢＳ）、空 腹 胰 島 素（ＦＩＮＳ）、空 腹 胰島素抵抗指數(shù)（ＦＩＲＩ）、肝組織勻漿ＩＬ－１８和血清ＩＬ－１８的測(cè)定：實(shí)驗(yàn)９周末，大鼠禁食２４ｈ后稱重，采用１０％水 合 氯 醛 （３ｍＬ／ｋｇ）麻 醉，經(jīng) 心 臟 穿 刺 采 血５ｍＬ，低 溫 離 心 機(jī) 上 ３０００ｒ／ｍｉｎ 離 心 后，置 于－８０℃冰箱保存待測(cè)。取冰凍保存的血清標(biāo)本，置室溫中復(fù)融，混勻后用全自動(dòng)化學(xué)分析儀檢測(cè)ＦＢＳ，放射免疫法測(cè)定 ＦＩＮＳ，雙抗體夾心法檢測(cè)血清ＩＬ－１８。ＦＩＲＩ＝ｌｎ（ＦＢＳ×ＦＩＮＳ／２２．５）。心臟采血后，迅速解剖摘取 肝 臟，取 肝 左 葉 相 同 部 位 ３ 塊 肝 組 織，１０％甲 醛 固 定，常 規(guī) 石 蠟 包 埋、切 片 （切 片 厚 度 約４μｍ），ＨＥ染色，光 鏡 下 觀 察。余下肝臟用生理鹽水漂洗去除 血 液，濾 紙 拭 干，稱 取３ｇ，加 入 冰 鹽 水３０ｍＬ，在冰水中勻漿，制 成１０％組 織 勻 漿，低 溫 離心機(jī)上３０００ｒ／ｍｉｎ離 心 后 取 上 清 液，置 于－８０℃冰箱保存待測(cè)。取冰凍保存的勻漿上清液標(biāo)本，置室溫中復(fù)融，雙抗體夾心法檢測(cè)肝組織勻漿ＩＬ－１８。

１．６ 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 ＳＰＳＳ１８．０軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ｘ珚±ｓ）表示，組間比較使用單因素方差分析中的ＳＮＫ 法。Ｐ＜０．０５為 差 異 有 統(tǒng)針刺研究 ２０１３年６月 第３８卷 第３期 · ９０２ ·計(jì)學(xué)意義。

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